湖北褐藻寡糖检测方法

    褐藻寡糖对烟C细胞内游离脯氨酸含量的影响研究发现,几乎所有逆境胁迫都能够造成植物体内游离脯氨酸积累。在植物体内,脯氨酸是作为1种渗透保护剂参与植物抗逆过程,缓解植物因低温伤害造成的渗透胁迫,因此检测植物体内游离内脯氨酸含量,可以在一定程度上判断植物遭受逆境胁迫危害程度。图5是烟C叶片游离脯氨酸含量变化。由图可知,水处理组经低温胁迫后,游离脯氨酸含量短时间内剧烈增加,6h时为空白对照的4倍,随着低温处理时间延长,游离脯氨酸积累加剧,48h后是空白对照的11.8倍。喷施寡糖后进行低温胁迫,0.05%～0.30%褐藻寡糖能够明显降低烟草体内游离脯氨酸积累,0.10%褐藻寡糖在24h以内效果比较好,但48h时游离脯氨酸含量明显升高。1.00%褐藻寡糖短时间内使烟C叶片内游离脯氨酸含量剧烈增加,随着时间延长积累不断加剧,表明较高浓度褐藻寡糖溶液会对烟C细胞产生毒副作用,低温下更加剧了细胞损伤破坏。褐藻寡糖是褐藻胶的降解产物，具有抗氧化、调节免疫、****、促进细胞生长等生理活性，应用范围大。湖北褐藻寡糖检测方法

   褐藻寡糖是植物重要的信号分子，同时因为其独特的组成和生物活性，参与植物的生理水平调节过程，促进植物生长。以小麦和玉米幼苗为实验材料，分别进行清水和褐藻寡糖的处理，能在根中促进生长素、赤霉素和细胞分裂素含量的上升，还可以促进蛋白酶和脂肪酶的活力。褐藻寡糖是一种多生物活性的小分子量化合物，对植物诱导抗病方面发挥巨大作用，提高植物对病虫害的抵抗力。褐藻寡糖还可以诱导植物产生抗低温的作用，以绿萝为实验材料，在低温处理前两天用分别用褐藻寡糖和清水处理两盆绿萝，褐藻寡糖可明显降低低温对绿萝的伤害。褐藻寡糖的处理明显提高了绿萝体内甜菜碱、过氧化物歧化酶、植保素、游离脯氨酸和可溶性糖的含量。喷施褐藻寡糖后，可以提高作物的抗旱能力。提高CAT、SOD、PAL和POD四种抗逆相关酶的活力，提升ABA含量，关闭了植物表面气孔，水分散失减少。以番茄为例，分别对番茄进行清水和褐藻寡糖的处理。陕西褐藻寡糖生物调节褐藻寡糖分子量低，水溶性强，稳定性高，具有很多生物活性，如抗瘤、抑菌、抗逆性等。

    对初步纯化的褐藻胶裂解酶进行了酶学性质研究,酶的适反应条件为50℃、pH8,在4～40℃、pH6～8范围内酶活力较稳定;Ca2+、Mg2+和Fe2+等离子对该酶有促进作用,EDTA、Ba2+、Zn2+等有抑制作用。通过优化获得褐藻胶的好酶解条件,在底物浓度、加酶量、体系、45℃条件下反应32h时,还原糖生成量为。以提取的褐藻多糖为原材料,按照此酶解工艺大量制备褐藻寡糖,通过Bio-GelP2凝胶色谱柱分离纯化,得到不同聚合度的7个寡糖组分F1-F7,TLC分析结果显示,其聚合度在1-7之间。去除自由基结果表明,褐藻多糖和寡糖都具有较强的抗氧化活性。自由基去除率随着糖浓度的增加而增强,在寡糖浓度、多糖浓度±±。多糖、寡糖浓度为±±。在相对湿度为85%和62%的环境下,褐藻多糖和褐藻寡糖都表现出较强的吸湿能力,褐藻寡糖更佳。在干燥环境下,褐藻多糖和寡糖都表现出很强的保湿效果,36h时褐藻寡糖的保湿率达到。抑菌结果显示,褐藻寡糖对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均具有较好的抑菌作用,褐藻多糖对白色念珠菌具有抑菌效果,对另3种细菌无抑制。

   寡糖片段的比对选择：对来源于植物细胞壁的寡糖-果胶寡糖、植物致病病菌细胞壁或虾蟹壳的寡糖-壳寡糖和海洋藻类的寡糖-褐藻寡糖进行促进植物生长和诱导植物抗逆活性的筛选，获得具有开发与应用前景的寡糖片段。促生长活性与机理研究：将筛选出的褐藻寡糖应用于植物植株、愈伤组织和悬浮细胞的生长调节，探讨了褐藻寡糖促生长的作用机制，为在植物促生长领域的开发应用提供理论基础。抗逆性能测试与机理表征：将不同浓度的褐藻寡糖片段进行植物抗逆性研究。探讨褐藻寡糖在低温、干旱、病害时对植物的诱导抗逆作用，探讨褐藻寡糖在诱导植物抗逆性产生过程中的作用机理，为褐藻寡糖在植物抗逆领域的开发应用奠定基础。寡糖与植物细胞的结合部位及影响因素：利用激光共聚焦显微技术研究褐藻寡糖与植物细胞的结合过程，并通过多种物质对标记寡糖的竞争性抑制，证明寡糖与植物细胞的结合与作用部位，初步探讨褐藻寡糖与植物细胞的结合与信号传导过程。褐藻寡糖的结合是与膜上的蛋白有关。通过封闭细胞膜上的钙离子通道，对其进行阻断后结合寡糖。

    前寡糖在植物促生长与诱导抗逆领域研究的现状，本研究选择不同来 源、不同分子量大小的褐藻寡糖、果胶寡糖和壳寡糖的寡糖片段，通过促生长与 抗逆作用对其生物活性进行比对筛选。以促进植物种子萌发和幼苗生长作为寡糖 片段的促生长指标，以大豆子叶法测定诱导产生植保素的合成作为寡糖片段的抗 逆指标，对寡糖种类、分子量水平和浓度大小与促生长和抗逆效应的影响进行研 究，以获得具有优良的促生长与抗逆性能的寡糖片段。褐藻寡糖 HZ3 在浓度为 0.1%时对豌豆促生长效果为明显，能够明显的促进豌 豆根和芽的生长，增加根和芽的干重。褐藻寡糖会增加白菜的根长、根尖数、根体积和根吸收面积。天津好的褐藻寡糖

褐藻寡糖可以促进大麦生长等提高植物的抗冻能力，促进植物种子萌发和根部生长。湖北褐藻寡糖检测方法

    选择三种来源（褐藻胶、果胶、壳聚糖）的不同分子量大小的九种寡糖片段进行研究。利用植物的促生长和抗逆指标进行筛选，获得了一种既具有明显的促生长作用，又具有抗逆作用的寡糖片段，为褐藻寡糖HZ3，经过质谱分析，其组分是以二、三糖为主的含有少量四糖和五糖的寡糖混合物。本研究第二部分是利用植物的植株、愈伤组织和悬浮细胞为材料，建立起寡糖促生长的综合性的验证方法。对植株分别选择了双子叶植物豌豆和单子叶植物玉米，利用寡糖浸种，分别考察在种子萌发与幼苗生长初期其体内蛋白酶、淀粉酶和激S含量的变化，结合种子与植株的生长指标，探讨寡糖的促生长作用机理。 湖北褐藻寡糖检测方法

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