rProteinA/GBeads4FF是将rProteinA/G高密度定向偶联到高度交联的琼脂糖凝胶微球表面,该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率,洗脱条件更均一,一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体。产品性能见表1。本产品主要用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究,也可用于抗体固定及其它相关研究。用户可根据目标抗体的种属来源及亚型选择微球的类别,纯化流程本产品主要应用于免疫沉淀(IP)以及免疫共沉淀(Co-IP)研究。2.1缓冲液的准备所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。平衡/洗杂液:0.15MNaCl,20mMNa2HPO4,pH7.0洗脱液:0.1M甘氨酸,pH3.0中和液:1MTris-HCl,pH8.5交联液:0.2M三乙醇胺,pH8.2交联剂:DMP(dimetylpimelimidatedihydrochloride)终止液:50mMTris,pH7.56X组氨酸标记(His-tag)蛋白纯化试剂说明。福建天地人和试剂代理厂家
蛋白纯化试剂抗体纯化rProtein A/G Beads 4FF纯化流程,样品准备上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH值,可以用平衡/洗杂液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用平衡/洗杂液透析。对于100mm培养皿中的贴壁细胞,吸除细胞培养液,使用预冷PBS洗涤一次后加入2ml细胞裂解液裂解细胞。对于悬浮细胞,离心收集细胞后,PBS洗涤一次后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。植物或动物组织样品可以使用液氮研磨方法裂解。具体的裂解方法请参考不同裂解液的使用说明,裂解液**终总蛋白浓度选择在0.5-1μg/μl范围内较为合适。通常针对目标蛋白的表达量不同,需要对总蛋白浓度进行预实验调整。2.3.去除非特异性结合(可省略)1)取200微升至1毫升蛋白样品,加入约1微克和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的3/5常州天地人和生物科技有限公司NormalIgG和20微升充分重悬的rProteinA/GBeads4FF,4℃缓慢摇动30分钟。2)2500rpm(约1000g)离心1分钟,取上清用于后续的免疫沉淀。注:哺乳动物细胞内有多种成分可以和IgG发生结合,可能会在后续免疫印迹中出现非特异性条带。使用normalIgG和rProteinA/GBeads4FF对裂解液预处理可以降低非特异性吸附。江西蛋白纯化试剂怎么样单克隆抗体纯化介质哪家有?
蛋白纯化试剂,rProteinA/GBeads4FF加抗体纯化流程3)抗原洗脱:提供以下两种抗原洗脱方案,可根据后期检测的需要选择不同的抗原洗脱方法。变性洗脱法:此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。向离心管中加入25μl1×SDS-PAGELoadingBuffer混合均匀,95℃加热5min。然后进行离心,800rpm离心1min,收集上清液,进行SDS-PAGE电泳,转膜后进行Western分析。非变性洗脱法:此方法洗脱的样品保持原有的生物活性,可用于后期功能分析。向离心管中加入5倍柱体积的洗脱液,用移液器吹打5次,混匀,然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,10min后,离心,800rpm离心1min,吸取上清液,收集洗脱组分,即为目标抗原,收集上清液至新的离心管中,并立即加入十分之一体积的中和液,将洗脱组分pH调节至7.0-8.0,用于后期功能分析。
麦芽糖结合蛋白标签(MBP-tag)蛋白亲和纯化介质:麦芽糖结合蛋白(MBP)标签,分子量约为42000Da,使用MBP标签往往可以促进连接蛋白的正确折叠,增加蛋白的表达水平,并使目标蛋白具有更高的可溶性,天地人和Dextrin Beads 6FF是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和介质层析,可以一步纯化MBP融合蛋白,结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱,保护了标签蛋白的活性,如果要去除MBP融合部分可用位点特异性蛋白酶切除,以上试剂信息由天地人和销售商上海楚知提供抗体亲和纯化产品分为通用性抗体,单克隆抗体,多克隆抗体。
蛋白纯化试剂产品介绍:HA标签是人流感血凝素的第98-106氨基酸序列YPYDVPDYA,对外源靶蛋白的空间结构影响小,容易构建成标签蛋白融合到蛋白N端或者C端,因此常被用于重组蛋白的融合表达。Anti-HAAntibody能够特异性识别HA标签,从而用于融合蛋白的表达和定位检测。抗体来源:小鼠交叉反应:HA标签融合蛋白克隆类型:单克隆抗体亚型:IgG2A来源:293细胞表达的重组抗体纯化方式:rProteinA亲和纯化产品纯度:≥95%,SDS-PAGE检测储存缓冲液:1×PBS(pH7.4),0.02%叠氮钠,50%甘油储存条件:干冰运输,-20℃可保存一年,避免反复冻融-上海楚知生物带负电荷的强阴离子交换介质。江西蛋白纯化试剂怎么样
蛋白纯化试剂洗脱液配制方法。福建天地人和试剂代理厂家
金属螯合亲合层析,是一种新型的应用于原**白纯化的技术。该方法通过蛋白质表面的一些特殊的氨基酸,使之与金属离子发生相互作用,从而对蛋白质进行亲和纯化。这些作用包括配价键结合、静电吸附、共价键结合等,其中以6个组氨酸残基组合的融合标签(His-Tag)在原**白表达中的应用**为***。His-Tag可结合在目的蛋白的C末端或N末端,形成特殊的结构,以便于进行下一步的纯化及检测。由于金属螯合亲合层析具有配体简单、吸附量大、分离条件温和、通用性强等特点,所以可选择范围广,高盐,存在变性剂以及去垢剂的上样条件下进行纯化,His-Tag正逐渐成为分离纯化蛋白质等生物工程产品***的技术之一。选试剂到楚知福建天地人和试剂代理厂家
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