上海楚知生物试剂分享篇:蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异,利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。一般蛋白纯化采用的方法为树脂法。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开,由于此时样本体积大、成分杂,要求所用的树脂高容量、高流速、颗粒大、粒径分布宽.并可以迅速将蛋白与污染物分开,必要时可加入相应的保护剂(例如蛋白酶抑制剂),防止目的蛋白被降解。精细纯化阶段则需要更高的分辨率,此阶段是要把目的蛋白与那些分子量大小及理化性质接近的蛋白区分开来,要用更小的树脂颗粒以提高分辨率,常用离子交换柱和疏水柱,应用时要综合考虑树脂的选择性和柱效两个因素。选择性指树脂与目的蛋白结合的特异性,柱效则是指各蛋白成分逐个从树脂上集中洗脱的能力,洗脱峰越窄,柱效越好。*有好的选择性,洗脱峰太宽,蛋白照样不能有效分离。His标签蛋白表达纯化方案。广东抗体纯化试剂代理厂家
蛋白纯化试剂Anti-HisAntibody产品介绍:His标签是一种分子量很小的标签,通常由6-8个组氨酸(His)组成,His标签是蛋白纯化和检测的常用标签之一,由于其分子量小,融合至目的蛋白后对蛋白的结构和特性几乎没有影响。抗His标签的抗体能对His标签融合蛋白进行准确的检测、定位和纯化,从而为广大科研者提供便利。抗体来源:小鼠交叉反应:His标签融合蛋白克隆类型:单克隆抗体亚型:IgG1来源:293细胞表达的重组抗体纯化方式:rProteinA亲和纯化产品纯度:≥95%,SDS-PAGE检测储存缓冲液:1×PBS(pH7.4),0.02%叠氮钠,50%甘油储存条件:干冰运输,-20℃可保存一年,避免反复冻融江苏离子交换试剂销售价格蛋白纯化试剂哪家好?
蛋白纯化试剂.产品介绍,DextrinBeads是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质,具体性能见表1。MBP可促进连接蛋白的正确折叠,增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真**白。DextrinBeads可以一步纯化MBP融合蛋白,结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱,保护了标签蛋白的活性。如果要去除MBP融合部分可用位点特异性蛋白酶切除。问题及解决方案问题原因分析:柱子反压过高填料被堵塞按照第3部分进行树脂清洗。裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜(0.22或0.45μm)过滤,或者离心去除。目的蛋白没有吸附目的蛋白未表达确保目的蛋白表达样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂样品透析或用结合液稀释细胞产生大量的淀粉酶影响结合力培养基中添加葡萄糖,抑制淀粉酶的表达融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲,影响了目的蛋白的结合力更换载体柱子结合时间太短将样品与DextrinBeads振荡孵育4度2小时或更长时间洗脱样品较杂目的蛋白降解加一些蛋白酶抑制剂,如PMSF、EDTA等平衡/洗杂不充分增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂,如树脂太脏按照第3部分进行树脂清洗
抗体纯化磁珠 1.抗体纯化磁珠试剂盒是否可以重复使用? 答:不推荐重复使用,不同样本之间容易造成污染。 2.若体系中含有木瓜蛋白酶,是否影响磁珠的使用? 答:木瓜蛋白酶是一种蛋白水解酶,目前对protein A的影响未知,建议客户慎用。 3.1mL抗体纯化磁珠能够用多少次? 答:1mL磁珠能够结合1.5-2.0mg抗体,客户需要根据结合抗体的量来确定使用磁珠的量。 4.试剂盒中的缓冲液用完后,能否告知配方? 答:试剂盒中缓冲液的成分都是保密的。可以采用以下的缓冲液进行替代。 结合缓冲液:PBST 150mM PBS,150mM NaCl,0.1% (v/v) Tween-20,pH7.2 洗脱缓冲液:甘氨酸缓冲液 0.1M Glycine,0.1% (v/v) Tween-20,pH2.5(该缓冲液适合于耐酸性的抗体)。 0.1M Glycine,3M MgCl2 (4M protein A/G) ,0.1% (v/v) Tween-20,pH4.5(该溶液含较高浓度的盐,不可直接进行SDS-PAGE。可以用透析或超滤的方法去除过多的盐)。 保存缓冲液: 50mM Tris-HCl,0.1%(v/v) Tween-20,0.01%(w/v) NaN3,pH7.5 洗涤缓冲液: 50mM Tris-HCl,0.1%(v/v) Tween-20,pH7.5) 再生缓冲液: 1% (v/v) TritonX-100 常见的蛋白质分离纯化方法。
麦芽糖结合蛋白标签(MBP-tag)蛋白亲和纯化介质:麦芽糖结合蛋白(MBP)标签,分子量约为42000Da,使用MBP标签往往可以促进连接蛋白的正确折叠,增加蛋白的表达水平,并使目标蛋白具有更高的可溶性,天地人和Dextrin Beads 6FF是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和介质层析,可以一步纯化MBP融合蛋白,结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱,保护了标签蛋白的活性,如果要去除MBP融合部分可用位点特异性蛋白酶切除,以上试剂信息由天地人和销售商上海楚知提供上海天地人和经销商联系方式.江西分子生物酶试剂怎么样
更高的抗体结合能力。广东抗体纯化试剂代理厂家
蛋白纯化试剂产品介绍,Strep-tag是一种在蛋白纯化系统中应用***的亲和标签。它包括两种类型Strep-tagII和TwinStrep-tagII。Strep-tagII是一个短肽标签,由8个氨基酸(WSHPQFEK)组成,可以作为N端或C端标签与蛋白质融合,对重组蛋白的影响很小。进一步改进的TwinStrep-tagII是一个顺序排列的两个Strep-tagII序列(通过内部氨基酸连接),该标签能够像Strep-tagII一样进行温和、快速的纯化。这两个标签可以自由结合Streptactin和STarmSterptactin中的任一配体。标签/配体的结合取决于所需的结合强度和应用。这两个标签和Streptaction和STarmSterptaction的亲和力在μg/ml范围内,这种高亲和性是任何其他现有亲和性标记系统都无法实现的。此外,这种结合标签和配体的灵活性允许在生理条件下纯化重组蛋白。广东抗体纯化试剂代理厂家
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