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蛋白纯化试剂NiSmartBeads是一种新型IMAC填料，螯合有非常牢固的Ni离子，具体性能见表1。NiSmartBeads主要应用于分泌到真核培养液上清中的组氨酸标记蛋白的捕获和纯化，可以在含有EDTA及DTT的情况下进行目的蛋白高效的纯化。NiSmartBeads有很强的组分兼容性，适用于***底物及盐浓度的缓冲条件2.纯化流程2.1缓冲液的准备可使用下列推荐缓冲液，也可根据自己的使用习惯配置不同的缓冲液体系，基本原理就是低咪唑上样，高咪唑洗脱，或者高pH上样，低pH洗脱。缓冲液在使用前比较好用0.22μm或者0.45μm滤膜过滤除菌。带正电荷的强阳离子交换介质。广东磁珠系列试剂哪里买

蛋白纯化试剂.产品介绍，DextrinBeads是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白（MBP）标签蛋白的亲和层析介质，具体性能见表1。MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真**白。DextrinBeads可以一步纯化MBP融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱，保护了标签蛋白的活性。如果要去除MBP融合部分可用位点特异性蛋白酶切除。问题及解决方案问题原因分析：柱子反压过高填料被堵塞按照第3部分进行树脂清洗。裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上柱前使用滤膜(0.22或0.45μm)过滤，或者离心去除。目的蛋白没有吸附目的蛋白未表达确保目的蛋白表达样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂样品透析或用结合液稀释细胞产生大量的淀粉酶影响结合力培养基中添加葡萄糖，抑制淀粉酶的表达融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲，影响了目的蛋白的结合力更换载体柱子结合时间太短将样品与DextrinBeads振荡孵育4度2小时或更长时间洗脱样品较杂目的蛋白降解加一些蛋白酶抑制剂，如PMSF、EDTA等平衡/洗杂不充分增加平衡液体积，确保树脂充分平衡/洗杂，如树脂太脏按照第3部分进行树脂清洗福建磁珠系列试剂生产商一步纯化检测原核，酵母或哺乳性动物细胞表达的标签蛋白。

蛋白质纯化注意事项：在进行任何一种蛋白质纯化的时候，都要时刻注意维护它的稳定性，保护它的活性，有一些通用的注意事项需要牢记，它们包括：1、操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。2、不要太稀，蛋白浓度维持在μg/mL～mg/mL。3、合适的pH，除非是进行聚焦层析，所使用的缓冲溶液pH避免与pI相同，防止蛋白质的沉淀。4、使用蛋白酶抑制剂，防止蛋白酶对目标蛋白的降解；在纯化细胞中的蛋白质时，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA对蛋白的污染。5、避免样品反复冻融和剧烈搅动，以防蛋白质的变性。6、缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环境。7、在缓冲溶液中加入0.1~1mmol/LDTT（二硫苏糖醇）(或β-巯基乙醇），防止蛋白质的氧化。8、加1~10mmol/LEDTA金属螯合剂，防止重金属对目标蛋白的破坏。9、使用灭菌溶液，防止微生物生长。   ；选试剂上海楚知生物

蛋白纯化试剂ChelatingBeads6FF是以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，配体为亚氨基二乙酸（IDA），结构如图1所示。ChelatingBeads6FF可以用于螯合各种金属离子，如Cu2+,Zn2+,Co2+,Ni2+和Fe3+，可根据金属离子对标签蛋白的结合力来选择需要螯合的金属离子。通常优先Ni2+，因为镍离子螯合填料可以很好的从各种表达体系中一步纯化his标签蛋白。Cu2+,Zn2+,结合力很强，可以用于纯化结合力弱的蛋白。Co2+和Fe3+对标签蛋白的特异性更强，纯度更高。预制胶的使用注意事项。

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蛋白纯化试剂抗体纯化rProteinA/GBeads4FF纯化流程：2.4.1抗体吸附1）取适量的rProteinA/GBeads4FF加入到2ml离心管中，800rpm离心1min，吸弃上清。2)加入0.5ml平衡液，悬浮填料（使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用），800rpm离心1min，吸弃上清。再重复两次。3)向步骤2)平衡的填料中加入抗体溶液，悬浮填料，室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管，约30min后，800rpm离心1min，收集上清液，留待检测。4)向3)的填料中加入0.5ml的洗杂液，悬浮填料，进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，800rpm离心1min，吸弃上清。再重复两次。2.4.2抗体交联(备选)如果需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱，请忽略本步骤，直接进行2.4.3。50ul-1ml填料量均可以按照以下步骤操作，无需额外增加交联液体积。1)向清洗过的填料中加入1ml交联液，800rpm离心1min，吸弃上清。2)再向其中加入1ml含20mMDMP（dimetylpimelimidatedihydrochloride）的交联液，此试剂需要现用现配，悬浮填料，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管，促使缓冲液和填料充分接触，约30min后，800rpm离心1min，吸弃上清。广东磁珠系列试剂哪里买

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