磁珠法口腔拭子基因组提取试剂盒可以快速地从口腔拭子中提取高质量DNA。提取出的基因组 DNA A260/A280 典型的比值达 1.7-1.9,产物可用于PCR、载体构建、核酸杂交等下游实验。
磁珠法口腔拭子基因组提取试剂盒组成
试剂名称 50T 200T
Buffer A 5ml 20ml
Buffer B 10ml 40ml
蛋白酶K 500μl 2ml
磁珠 10ml 40ml
Wash Buffer 125ml 100ml
Elution Buffer 5ml 20m
l2.问题及解决方案
提不到DNA或产量很低取样量少:取样前半小时漱口。样品保存不当:确保样品新鲜有效。可能没加入ProteinaseK,或加入量不足,导致细胞裂解不完全,或者65℃孵育时间过短。 2.DNA未完全回收:减少上样量或增加磁珠量,确保样品充分吸附。确保磁珠与样品充分混匀,吸附时磁珠一直保持悬浮状态。3洗脱液中无/很少DNA:确保Washbuffer中加入相应的乙醇,用完后要密封保存,防止挥发。确保洗脱液中的盐浓度和pH。洗脱液用量不当:调整洗脱液体积。磁珠风干时间太长,磁珠未完全分散。4,DNA纯度不高,有污染RNA污染:检查RNase是否有问题,适当增加RNase的用量。洗杂不充分,含有杂质。若用去离子水洗脱DNA,A260/280比值会偏低,但并不表示纯度低。 更高的抗体结合能力。湖南核酸提取试剂生产商
抗体纯化磁珠 1.抗体纯化磁珠试剂盒是否可以重复使用? 答:不推荐重复使用,不同样本之间容易造成污染。 2.若体系中含有木瓜蛋白酶,是否影响磁珠的使用? 答:木瓜蛋白酶是一种蛋白水解酶,目前对protein A的影响未知,建议客户慎用。 3.1mL抗体纯化磁珠能够用多少次? 答:1mL磁珠能够结合1.5-2.0mg抗体,客户需要根据结合抗体的量来确定使用磁珠的量。 4.试剂盒中的缓冲液用完后,能否告知配方? 答:试剂盒中缓冲液的成分都是保密的。可以采用以下的缓冲液进行替代。 结合缓冲液:PBST 150mM PBS,150mM NaCl,0.1% (v/v) Tween-20,pH7.2 洗脱缓冲液:甘氨酸缓冲液 0.1M Glycine,0.1% (v/v) Tween-20,pH2.5(该缓冲液适合于耐酸性的抗体)。 0.1M Glycine,3M MgCl2 (4M protein A/G) ,0.1% (v/v) Tween-20,pH4.5(该溶液含较高浓度的盐,不可直接进行SDS-PAGE。可以用透析或超滤的方法去除过多的盐)。 保存缓冲液: 50mM Tris-HCl,0.1%(v/v) Tween-20,0.01%(w/v) NaN3,pH7.5 洗涤缓冲液: 50mM Tris-HCl,0.1%(v/v) Tween-20,pH7.5) 再生缓冲液: 1% (v/v) TritonX-100 广东核酸提取试剂纯化流程常州天地人和试剂经销商。
蛋白纯化试剂.产品介绍,DextrinBeads是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质,具体性能见表1。MBP可促进连接蛋白的正确折叠,增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真**白。DextrinBeads可以一步纯化MBP融合蛋白,结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱,保护了标签蛋白的活性。如果要去除MBP融合部分可用位点特异性蛋白酶切除。问题及解决方案问题原因分析:柱子反压过高填料被堵塞按照第3部分进行树脂清洗。裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上柱前使用滤膜(0.22或0.45μm)过滤,或者离心去除。目的蛋白没有吸附目的蛋白未表达确保目的蛋白表达样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂样品透析或用结合液稀释细胞产生大量的淀粉酶影响结合力培养基中添加葡萄糖,抑制淀粉酶的表达融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲,影响了目的蛋白的结合力更换载体柱子结合时间太短将样品与DextrinBeads振荡孵育4度2小时或更长时间洗脱样品较杂目的蛋白降解加一些蛋白酶抑制剂,如PMSF、EDTA等平衡/洗杂不充分增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂,如树脂太脏按照第3部分进行树脂清洗
试剂篇:一、根据蛋白质溶解度不同的分离1、蛋白质的盐析法:中性盐对蛋白质的溶解度有***影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出,这种现象称盐析。2、等电点沉淀法:蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力**小,因而溶解度也**小,各种蛋白质的等电点有差别,可利用调节溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使之沉淀,但此法很少单独使用,可与盐析法结合用。二、根据蛋白质分子大小的差别的分离方法1、透析与超滤:透析法是利用半透膜将分子大小不同的蛋白质分开。超滤法是利用高压力或离心力,使水和其他小的溶质分子通过半透膜,而蛋白质留在膜上,可选择不同孔径的滤膜截留不同分子量的蛋白质。2、凝胶过滤法: 也称分子排阻层析或分子筛层析,这是根据分子大小分离蛋白质混合物***的方法之一。柱中**常用的填充材料是葡萄糖凝胶(Sephadex gel)和琼脂糖凝胶(agarose gel)。结合能力强,结合能力中等。
随着分子生物学的发展,越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术,并研制成套试剂盒,使基因克隆表达变得越来越容易lIl。但分子生物学的上游工作往往并非是**终目的,分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物,以研究其生物学作用,或者大量生产出可用于疾病***的生物制品。相对与上游工作来说,分子克隆的下游工作显得更难,蛋白纯化工作非常复杂,除了要保证纯度外,蛋白产品还必须保持其生物学活性。纯化工艺必须能够每次都能产生相同数量和质量的蛋白,重复性良好。这就要求应用适应性非常强的方法而不是用能得到纯蛋白的比较好方法去纯化蛋白。在实验室条件下的好方法却可能在大规模生产应用中失败,因为后者要求规模化,且在每日的应用中要有很好的重复性,上海楚知为您提供质量的蛋白纯化试剂脱盐柱产品哪一家的好?河南分子生物酶试剂规格
GST标签蛋白纯化和标签去除。湖南核酸提取试剂生产商
生物试剂(Biochemicalreagent)是指有关生命科学研究的生物材料或有机化合物,以及临床诊断、医学研究用的试剂。由于生命科学面广、发展快,因此该类试剂品种繁多、性质复杂。主要有电泳试剂、色谱试剂、离心分离试剂、免疫试剂、标记试剂、组织化学试剂、透变剂和致*物质、杀虫剂、培养剂、缓冲剂、电镜试剂、蛋白质和核酸沉淀剂、缩合剂、超滤膜、临床诊断试剂、染色剂、抗氧化剂、防霉剂、去垢剂和表面活性剂、生化标准品试剂、生化质控品试剂、分离材料等等。我国的试剂规格基本上按纯度(杂质含量的多少)划分,共有高纯、光谱纯、基准、分光纯、优级纯、分析和化学纯等7种。国家和主管部门颁布质量指标的主要优级纯、分级纯和化学纯3种。(1)优级纯(GR:Guaranteedreagent),又称一级品或保证试剂,,这种试剂纯度比较高,杂质含量比较低,适合于重要精密的分析工作和科学研究工作,使用绿色瓶签。(2)分析纯(AR),又称二级试剂,纯度很高,,略次于优级纯,适合于重要分析及一般研究工作,使用红色瓶签。(3)化学纯(CP),又称三级试剂,≥,纯度与分析纯相差较大,适用于工矿、学校一般分析工作。使用蓝色(深蓝色)标签。湖南核酸提取试剂生产商
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