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CCK-8试剂盒使用注意事项：1、建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。2、有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰OD值读数。3、白细胞可能需要培养较长时间。4、当使用标准96孔板时，贴壁细胞的至小接种量至少为1000个/孔(100μL培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2500个/孔(100μL培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。5、如果没有450nm的滤光片，可以使用吸光度在430-490nm之间的滤光片，但是450nm滤光片的检测灵敏度很高。6、培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。CCK-8的英文全称是CellCountingKit-8。江阴Deferoxamine mesylate（甲磺酸去铁胺）

蛋白酶抑制剂Cocktail作用是保护蛋白免受蛋白酶降解威胁，提高蛋白得率。对于绝大多数蛋白，Cocktail都有很好的效果。如果还是出现蛋白得率低的情况，需要谨慎检查实验步骤和方案设计，大限度发挥Cocktail作用，减少导致蛋白降解的环节。例如，细胞处理前，先要将裂解体系完全准备好，预先加入Cocktail并混匀，将要破碎的细胞，收集完后或从冰箱中取出后立即加入准备好的裂解液中，给予蛋白全程保护。absin可提供蛋白酶抑制剂Cocktail！海安Tamoxifen（他莫昔芬）购买抑制剂时要货比三家，才能选到性价比高的抑制剂。

基于BTP衍生的STAT3抑制剂：SH2结构域是许多非肽类STAT3抑制剂分子的结合位点，SH2结构域蛋白表面具有三个溶剂可接近的亚口袋：磷酸化Tyr705(p-Tyr705)结合口袋(pY口袋，残基591、609-620)、Leu706亚位点(pY+1口袋，残基626-639)、疏水侧口袋(pY-X口袋，残基592-605)。其中pY亚口袋较宽，由极性残基Lys591、Ser611、Glu612、Ser613、Arg609组成，在STAT3与其他STAT成员的同源或杂源二聚化过程中，能与p-Tyr705形成氢键和盐桥；pY+1和pY-X主要为非极性和疏水，由Thr620、Trp623、Lys626、Gln635、Val637、Ile659组成的pY+1口袋是动态的，且难以靶向；由Glu594、Arg595、Ile597、Ile634组成的pY-X口袋是STAT3独有的，有助于设计选择性STAT3抑制剂。大多数STAT3抑制剂通常不止占据一个亚口袋，但三个口袋对于亲和力并不等同，pY口袋亲和力高，因此许多STAT3抑制剂目的在于设计靶向pY口袋。

CCK-8试剂盒操作说明：细胞增殖-毒性检测。1、在96孔板中配制100μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24h（37℃，5%CO2）。2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如：6、12、24或48h）。4、向每孔加入10μLCCK-8溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。5、将培养板在培养箱内孵育1-4h。6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。7、若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24h内测定，吸光度不会发生变化。注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。蛋白酶抑制剂，可有效抑制纤溶酶、胰蛋白酶。

蛋白酶体抑制剂的作用机制。人类免疫缺陷病毒基因编码过程中需要一种重要的蛋白酶，这种蛋白酶属于特异天冬酰蛋白酶，能够将基因表达产生的蛋白裂解，成为病毒有活性的结构，这是艾zi病病毒复制必不可少的关键物质。蛋白酶体抑制剂主要有奈非那韦、沙奎邦韦、茚地那韦等药物，这些药物对艾zi病有一定的治理效果，可以控制病毒的复制。蛋白酶体抑制剂的不良反应。有研究显示，患者服用蛋白酶体抑制剂后可能会出现脂肪异常沉积的现象，患者可出现水牛背、满月脸、壶状腹等，是脂肪在身体不同部位沉积的表现。但是也有一部分患者服用药物后会出现消脂消耗的现象，多发生在四肢和脸部。蛋白酶体抑制剂为什么会引起脂肪沉积，目前尚不清楚，可能是代谢功能受到影响的结果。大部分直接靶向STAT3的抑制剂是靶向SH2结构域的化合物。杭州Thymidine

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CCK-8试剂盒使用注意事项是什么呢？杭州昊鑫生物科技股份有限公司小编介绍，CCK-8试剂盒使用注意事项：1、CCK-8的培养时间一般为1-4小时，在培养30分钟左右即可取出肉眼观察显色程度，根据细胞种类而定，需要摸索条件，CCK-8的至佳反应时间以具体显色的至佳时间为准。2、使用96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于96孔板周围一圈容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的PBS、水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。江阴Deferoxamine mesylate（甲磺酸去铁胺）

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