胎牛血清是一种天然产物,原产地牛源的生长环境和健康状况对于血清的产量和品质都有着重要影响。当产地的气候、环境等因素发生变化时,牛只数量的减少会直接影响血清产量,例如近年来澳洲爆发的森林火灾、千年难遇洪水、蓝舌病病情等,对当地畜牧产业造成了深远影响。随全球科研领域不断发展,血清需求量日益增加,合规血源变得愈发珍稀,高等血清更是一货难求。受此国际市场环境的巨大冲击,近期澳大利亚、新西兰和南美乌拉圭进口胎牛血清的原料价格持续高涨。虽然胎牛血清与新生牛血清的成分并不存在很大的差别,可是诸如促细胞生长因子和促贴附因子等组份并不相同。兴化MEM
如今已经成为各大实验室“常客”的胎牛血清,是一种采集自新鲜的牛血液的优良血清。胎牛血清主要的作用就是提供基本的营养物质以及提供接触和伸展因子,有效避免细胞贴壁受到机械的损伤。如此看来胎牛血清确实发挥出非常大的作用,那么为了让其充分发挥更大的价值该注意哪些事项呢?注意避免沉淀加入培养液,添加胎牛血清的时候要注意避免把沉淀加入培养液,因为如果培养液有沉淀的存在,会使得其中培养的细胞产生大量的黑点,除此之外,细胞的表面还很可能会覆盖一层油状物质,总之出现这样的情况会极其不利于细胞的正常生长。那么为了更大程度减少血清的损失,可以把所有有沉淀的血清进行收集并做离心处理,之后便可将上清液加入培养液中使用。瑞安食蟹猴血清胎牛血清的免疫球蛋白含量要远远低于新生牛血清,胎牛的血清相对来说比较纯。
为什么使用胎儿血清而不是新生儿血清或成人血清?胎儿血清含有较多的生长因子,丙种球蛋白(即抗体)含量较低,非胎儿血清也有。这些很重要,因为生长因子促进细胞存活和增殖,而抗体可以与培养的细胞结合。此外,与成人或新生儿相比,胎儿血清中的补体蛋白(补体)含量较低。这些补体具有溶解培养细胞和干扰免疫测定的不良作用。血清和血浆均来自全血,通过离心去除包括红细胞在内的成分。血浆和血清之间的区别在于,凝血蛋白存在于血浆中,但已从血清中去除。血浆一般是通过在离心前向血液中加入抗凝剂来制备的,但不会去除凝血蛋白。通过在离心前使血液凝固或通过普遍/渐进离心来制备血清。因此,与凝血相关的纤维蛋白原和蛋白质不存在于血清中。
胎牛血清使用中的常见问题:血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。实验室如何选择适合的血清?国内一致认为HYCLONE的血清是更好的,但是根据我在北美的经历,国外一般认为GIBCO比HYCLONE好,所以并不是价格决定质量,但是总的来说这两种价格普遍偏贵,一般不是太娇气的细胞,国产的就够用了。此外,由于国内HYCLONE,GIBCO并没有生产线,我们只能从代理商那里买,而代理商又鱼龙混杂,所以买到假货的可能性也很大。胎牛血清对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。
胎牛血清的生产和质控也是影响产品品质的重要因素。胎牛血清生产流程可分为原料采集、原料加工及冷链运输三个重要环节。生产过程中的每一步,如血源采集、加工、过滤、辐照处理、包装、质检和物流等,都必须遵循行业高标准,以确保产品的优异品质。一个符合业内标准的血清生产流程是这样的:在严格规范的健康与检疫监控下,怀孕母牛从牧场运输到屠宰场,胎牛经心脏穿刺取血,得到胎牛血清原料;新生牛和小牛血清则取自出生相应天数的牛血液。按照国际标准,血清生产需经过多级预过滤和三级0.1μm精过滤,以去除包括支原体在内的各种微生物与杂质。生产后的血清需经过严苛的质检环节,得到合格成品后,保存和运输环节也要严格遵循相关要求。胎牛血清勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。南京DMEM (Low Glucose)
胎牛血清是细胞培养中用量更大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份。兴化MEM
胎牛血清应该怎么选?血源可追溯性:选择来源安全、可追溯的FBS对于细胞培养来说至关重要。目前市面上存在较多以假乱真的FBS产品,科研工作者对血清的真实产地、来源难以鉴别。对此,国际血清行业协会(ISIA)实施了供应链可追溯性的行业标准,以确保FBS的质量和安全性。例如,FBS供应商是否保留原产地的可追溯记录?是否持有血清生产各阶段处理、运输和商业交易的文件?这些都是判断FBS可追溯性需要考虑的因素。产品检测,每款FBS在生产上市之前,必须经过严格的质控检测。质控环节必不可少,以确保上市的血清符合规定合乎规格,而血清产品分析证书(COA)就是FBS质控的重要体现。在COA中,常规的检测指标包括内有害元素、总蛋白、细菌、病毒等,例如我国药典规定,FBS中内有害元素含量应≤10EU/mL,另外总蛋白为30-50mg/mL、血红蛋白检测不高于30mg/dL。兴化MEM
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