什么是优良的胎牛血清?免疫球蛋白,国产血清的只是定性检测,结果也很不准确,进口胎牛血清大多定量检测。免疫球蛋白的数值能完全体现出采集血液的时的牛龄情况,国产血清,基本都是新生牛的,血清中容易产生IgM,IgG的含量也偏高,进口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也较低。维生素含量,此外,维生素的使用也是要考虑在内的。国内外的血清,都不对维生素进行测试(无四环素胎牛血清理外)。其中,由于国外维生素使用较为严格,用量有限,同时每头奶牛的产品包括血清都可以追溯源头,所以国外胎牛血清不含维生素或者含量极低。但是国内由于维生素使用普遍,血清中残留量很高,导致国产血清质量很差,不利于细胞培养。胎牛血清能识别并结合维生素、脂类、金属和其他元素等,能调节它们所结合分子的活力。昆山DMEM/F12
胎牛血清与新生牛血清的区别:组份与比例不同,虽然胎牛血清与新生牛血清的成分并不存在很大的差别,可是诸如促细胞生长因子和促贴附因子等组份并不相同,而且两者之间的元素以及其他活性物质的比例也不同。胎牛血里的生长因子适合牛体内各种细胞生长,通常在8个月胎龄后慢慢消失。另外,胎牛血清的免疫球蛋白含量要远远低于新生牛血清,胎牛的血清相对来说比较纯,所以培养细胞的效果会更佳。用途与用法不同,由于胎牛血清与新生牛血清存在细微差异,因此它们的用途与用法也不尽相同。句容标准胎牛血清Fetal Bovine Serum(Standard)胎牛血清的完全培养基仍然是目前主流的细胞培养体系。
胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)是指在健康母牛正常分娩前采集胎牛血液加工而成的血清,由于血清采集时间早,其胎球蛋白较多,血清白蛋白含量高,而γ-球蛋白含量极低,并富含多种生长因子,因此,是培养细胞更为优良的牛血清。牛血清的成分复杂,主要包含蛋白质、多肽、元素、氨基酸、葡萄糖等多种营养成分。虽然其中大部分成分已为人知,但还有一部分也还不清楚,而且其组分及含量常依动物性别、年龄、生理状态、营养条件不同而有差异。血清理含有促进细胞生长的成分外,同时含有内有害元素、血色素、补体、抗体等其他有害成分,影响细胞生长甚至导致细胞死亡,因此,通常需要测试工作才知道对细胞生长的效果。低质量的血清常被病毒、菌体和支原体等微生物传染,导致细胞培养失败,浪费了科研人员的时间和精力。
胎牛血清应该怎么选?血源可追溯性:选择来源安全、可追溯的FBS对于细胞培养来说至关重要。目前市面上存在较多以假乱真的FBS产品,科研工作者对血清的真实产地、来源难以鉴别。对此,国际血清行业协会(ISIA)实施了供应链可追溯性的行业标准,以确保FBS的质量和安全性。例如,FBS供应商是否保留原产地的可追溯记录?是否持有血清生产各阶段处理、运输和商业交易的文件?这些都是判断FBS可追溯性需要考虑的因素。产品检测,每款FBS在生产上市之前,必须经过严格的质控检测。质控环节必不可少,以确保上市的血清符合规定合乎规格,而血清产品分析证书(COA)就是FBS质控的重要体现。在COA中,常规的检测指标包括内有害元素、总蛋白、细菌、病毒等,例如我国药典规定,FBS中内有害元素含量应≤10EU/mL,另外总蛋白为30-50mg/mL、血红蛋白检测不高于30mg/dL。胎牛血清的贴壁因子有助于细胞贴壁,并提供结合蛋白。
胎牛血清使用中的常见问题:如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。胎牛血清起酸碱度缓冲液作用。常州RPMI 1640培养基(无硝酸钙)
胎牛血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。昆山DMEM/F12
胎牛血清的保存方法:热灭活是指56℃,30分钟加热已完全解冻的血清。加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分灭活。除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉淀物明显增多,而且还会影响血清的质量。补体参与反应有:细胞毒作用,平滑肌细胞收缩,肥大细胞和血小板释放组胺,增强吞噬作用,促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。血清中的沉淀物絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理。显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物的形成会明显增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。昆山DMEM/F12
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