江山RPMI 1640 Medium (含双抗)

胎牛血清的生产和质控也是影响产品品质的重要因素。胎牛血清生产流程可分为原料采集、原料加工及冷链运输三个重要环节。生产过程中的每一步，如血源采集、加工、过滤、辐照处理、包装、质检和物流等，都必须遵循行业高标准，以确保产品的优异品质。一个符合业内标准的血清生产流程是这样的：在严格规范的健康与检疫监控下，怀孕母牛从牧场运输到屠宰场，胎牛经心脏穿刺取血，得到胎牛血清原料；新生牛和小牛血清则取自出生相应天数的牛血液。按照国际标准，血清生产需经过多级预过滤和三级0.1μm精过滤，以去除包括支原体在内的各种微生物与杂质。生产后的血清需经过严苛的质检环节，得到合格成品后，保存和运输环节也要严格遵循相关要求。胎牛血清提供维持细胞指数生长的激元素、基础培养基中没有或量很少的营养物。江山RPMI 1640 Medium (含双抗)

如何避免血清中产生沉淀?按如下操作可避免沉淀的产生：(1)解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。(2)血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。(3)勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。(4)勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。(5)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。(6)若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。小牛血清经销商胎牛血清提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

胎牛血清的保存方法：1、需要长期保存的胎牛血清须储存于-20℃-70℃低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在37℃放置太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中的有效成分会被破坏，而影响血清质量。如果一次无法用完一瓶，可将40～45ml分装于无菌50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%，因此，血清在冻入低温冰箱前，必须预留一定体积空间，否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。2、一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物，则可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。3、胎牛血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃至-70℃低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温，待全部溶解后再分装，一般以50ml无菌离心管可分装40～45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。

小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项?来源不同：胎牛血清(FetalBovineSerum，FBS)是在屠宰怀孕母牛的时候，通过心脏穿刺采集血液获取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calfserum，CS)采自出生10至14天的小牛。组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、元素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，基本不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。胎牛血清勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

胎牛血清应该怎么选？血源可追溯性：选择来源安全、可追溯的FBS对于细胞培养来说至关重要。目前市面上存在较多以假乱真的FBS产品，科研工作者对血清的真实产地、来源难以鉴别。对此，国际血清行业协会（ISIA）实施了供应链可追溯性的行业标准，以确保FBS的质量和安全性。例如，FBS供应商是否保留原产地的可追溯记录？是否持有血清生产各阶段处理、运输和商业交易的文件？这些都是判断FBS可追溯性需要考虑的因素。产品检测，每款FBS在生产上市之前，必须经过严格的质控检测。质控环节必不可少，以确保上市的血清符合规定合乎规格，而血清产品分析证书（COA）就是FBS质控的重要体现。在COA中，常规的检测指标包括内有害元素、总蛋白、细菌、病毒等，例如我国药典规定，FBS中内有害元素含量应≤10EU/mL，另外总蛋白为30-50mg/mL、血红蛋白检测不高于30mg/dL。胎牛血清可以使细胞传代时，将剩余的胰蛋白酶失去活性，因此能够起到保护细胞不受到伤害的作用。DMEM (Low Glucose)采购

虽然胎牛血清与新生牛血清的成分并不存在很大的差别，可是诸如促细胞生长因子和促贴附因子等组份并不相同。江山RPMI 1640 Medium (含双抗)

胎牛血清给细胞提供的益处主要体现在6个方面：1、提供细胞生长所需的天然元素或天然的生长因子。2、提供天然的结合蛋白，能识别氨基酸、脂质、金属离子和元素等，能结合并调节它们的活性。已知清蛋白(albumin）即具有上述功能，并对细胞代谢、生物合成、增殖和存活具有潜在的影响。又如胎牛血清中富含胎球蛋白（Fetuin），具有多个钙离子结合位点，因而能调节和维持血清中的钙离子浓度。3、天然含有粘附蛋白等细胞外基质成分，促进细胞的附着、铺展。4、提供消毒功能。这主要通过血清中的某些蛋白与有毒的金属离子结合来完成的。如金属硫蛋白，对多种重金属有高度亲和性，并可清理细胞生长环境中的氧自由基（·O），具有很强的抗氧化活性，可防止细胞衰老。5、提供酸碱度缓冲的作用，以及维持渗透压。6、提供蛋白酶抑制剂，使细胞免受蛋白酶的损伤。因此在细胞消化时，常用含血清的培养液终止胰酶对细胞的作用。江山RPMI 1640 Medium (含双抗)

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