对于细胞培养而言,胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)的重要性不言而喻。尽管近年来无血清培养基和非动物来源的培养基越来越受到关注,但目前大部分细胞还无法适用这些培养基,并且存在费用较高和细胞生长较缓慢的缺点,因此,含有FBS的完全培养基仍然是目前主流的细胞培养体系。把细胞养好的三个关键要素是:良好的细胞来源,正确的实验操作,以及合适的培养体系。其中“合适的培养体系”就是要创造适合细胞生长的环境,给细胞建立一个满意的“家”,而FBS就好比于这个家的装修,可以提高细胞的居住环境和舒适性,让细胞更好更快地生长!胎牛血清提供蛋白酶抑制剂,使细胞免受蛋白酶的损伤。DMEM (High Glucose)售价
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成分虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、元素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。牛血清是细胞培养中用量更大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成分,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。1.提供对维持细胞指数生长的元素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。2.提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他元素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到消毒作用。4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。平湖DMEM/F12胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。
为什么血清具有批次间可变性?血清是从生物来源提取的,其成分会存在批次之间的差异。为了尽可能减少应用变化,我们对每个批次均执行严格的质量检测,使用高质量标准,尽可能确保批间一致性。胎牛血清的颜色和我之前使用的批次不同,会影响血清使用效果吗?血清的颜色取决于血红蛋白浓度,而该参数的差异不会影响血清的性能。为什么血清的来源很重要?血清的来源(或原产地)是指收集未加工血液的国家。不要与血清分离、过滤或其他加工处理所在国家混淆,二者可能是不同的。血清供应商的CoA文件应该明确写明血清原产地和加工信息。
胎牛血清使用中的常见问题:血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400g,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。实验室如何选择适合的血清?国内一致认为HYCLONE的血清是更好的,但是根据我在北美的经历,国外一般认为GIBCO比HYCLONE好,所以并不是价格决定质量,但是总的来说这两种价格普遍偏贵,一般不是太娇气的细胞,国产的就够用了。此外,由于国内HYCLONE,GIBCO并没有生产线,我们只能从代理商那里买,而代理商又鱼龙混杂,所以买到假货的可能性也很大。血清根据血红蛋白含量的不同,表现的颜色也不一样。
如何避免血清中产生沉淀?按如下操作可避免沉淀的产生:(1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。(2)血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。(3)勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。(4)勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。(5)血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。(6)若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。胎牛血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均。杭州DMEM(高糖)培养基(含双抗)
胎牛血清严格质检,不含各种外源因子,无细胞病变效应,BVD、PI-3、IBR等病毒均为阴性。DMEM (High Glucose)售价
血清中出现沉淀的原因很多:反复的冻融会使血清脂蛋白发生变性造成浑浊,可通过分装成单次用量减少冻融来尽量避免此种情况。血清是在低温环境下迅速加工以保持其生长特性,血清中遗留的一些纤维蛋白原在解冻时会转化成纤维蛋白。过量的纤维蛋白在血清中呈现为可见的絮状物质,可通过400xg离心移除。不建议通过过滤血清来移除絮状物质,因为滤器可能堵塞,或者意外截留到重要的蛋白质。牛血清产品检测项目包括内有害元素、细菌、菌体、霉菌、支原体和噬菌体检测吗?胎牛血清采用非常严谨的标准检测过这些相关微生物的污染,具体可以参加每批次的CoA。什么是γ辐照的血清(胎牛血清)?γ辐照的血清通过暴露于放射性60Co产生的25-40kGy剂量的γ射线来灭活病毒和其他外来微生物(比如支原体)。γ辐照处理不影响血清的理化性质或细胞培养性能。DMEM (High Glucose)售价
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