胎牛血清使用中的常见问题:如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。对于细胞培养而言,胎牛血清(FetalBovineSerum,FBS)的重要性不言而喻。海安RPMI 1640 Medium (含双抗)
为什么有些血清是热灭活的?如何热灭活?哺乳动物血清中天然存在的补体蛋白参与细胞溶解事件、收缩平滑肌、从肥大细胞和血小板中释放组胺和激发淋巴细胞和髓细胞。热灭活破坏了血清中补体的活性,因此免疫学应用,培养胚胎干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时推荐使用。热灭活方法是在56°C水浴中处理30分钟,并每隔大约10分钟旋转一次瓶子。为了保持精确,可使用一个类似大小的瓶子作为对照,对照瓶内放入同等体积的水,并放置一个温度计,在温度到达56°C时开始计时30分钟。热灭活过程必须小心控制,避免血清中支持细胞和组织繁殖的关键蛋白组分发生降解。常熟培养基胎牛血清提供蛋白酶抑制剂,使细胞免受蛋白酶的损伤。
什么是优良的胎牛血清?微生物,包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体、各类病原性的病毒等。随着国内血清厂家生产条件的改善提高,细菌、霉菌等“大型”微生物几乎能100%控制,支原体经过0.1μm过滤,大多也能清理。大肠杆菌噬菌体的污染还是比较严重的,主要是生产环境过程中带入,又无法过滤,很难彻底清理,但对血清质量影响不大。病原性的病毒,特别是BVDV,在国产血清中几乎90%以上都存在,这类微生物是影响国产血清质量的重要因素之一,而进口胎牛血清相对国产血清而言,检出率不高。
胎牛血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、元素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。功能:牛血清是细胞培养中用量更大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。1.提供对维持细胞指数生长的元素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。2.提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他元素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到消毒作用。4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。5.起酸碱度缓冲液作用。6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。胎牛血清是细胞培养中用量更大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份。
胎牛血清给细胞提供的益处主要体现在6个方面:1、提供细胞生长所需的天然元素或天然的生长因子。2、提供天然的结合蛋白,能识别氨基酸、脂质、金属离子和元素等,能结合并调节它们的活性。已知清蛋白(albumin)即具有上述功能,并对细胞代谢、生物合成、增殖和存活具有潜在的影响。又如胎牛血清中富含胎球蛋白(Fetuin),具有多个钙离子结合位点,因而能调节和维持血清中的钙离子浓度。3、天然含有粘附蛋白等细胞外基质成分,促进细胞的附着、铺展。4、提供消毒功能。这主要通过血清中的某些蛋白与有毒的金属离子结合来完成的。如金属硫蛋白,对多种重金属有高度亲和性,并可清理细胞生长环境中的氧自由基(·O),具有很强的抗氧化活性,可防止细胞衰老。5、提供酸碱度缓冲的作用,以及维持渗透压。6、提供蛋白酶抑制剂,使细胞免受蛋白酶的损伤。因此在细胞消化时,常用含血清的培养液终止胰酶对细胞的作用。胎牛血清可以起到缓解酸碱度的作用,目前这方面的作用已经得到了证实。扬中类胎牛血清Fetal Bovine Serum (Similar)
胎牛血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。海安RPMI 1640 Medium (含双抗)
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、元素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。显然,胎牛血清是品质更高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分更少。海安RPMI 1640 Medium (含双抗)
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