扫描电镜(SEM)具有分辨率高和景深长等特点,因此图像层次丰富,立体感强,能够显示细胞和组织的三维结构形貌(图12-13),因此普遍应用于生物样品表面及其断面微细结构的观察。 自1966年首先台商品SEM诞生以来,发展一直很快,仪器本身性能如分辨率和多功能等不断提高外,样品制备技术也不断地改进和完善。样品制备的质量是直接决定SEM能否发挥较为佳性能,并拍出理想图片的关键所在。考虑到生物样品质地柔软、容易变形、导电性差、二次电子发射率低以及含水量多等特点,在制备SEM样品时,必须掌握以下原则: (1)每一操作过程,都应注意防止样品的污染和损伤,使被观察的样品尽可能保持原有的外貌和微细结构; (2)去除样品内水份,以利于维持SEM的真空度和防止镜筒的污染。但在脱水和干燥处理时,要尽量减少避免样品体积变小和收缩变形等人工损伤; (3)降低样品表面的电阻率,增加样品的导电性能,以提高二次电子发射率,建立适度的反差和减少样品的充放电效应; (4)观察组织细胞的表面或内部微结构,应注意和保护样品的观察面。 扫描电镜观察生物试样:由于电子照射面发生试样的损伤和污染程度很小,这一点对观察一些生物试样特别重要!宁夏推荐的扫描电镜多少钱
分辨能力是扫描电镜SEM较为重要的性能指标,目前,钨灯丝SEM二次电子像的分辨率为3nm~6nm,但是,这不是日常工作能实现的,只是验收指标,它与观察条件、图象的亮度、对比度、信噪比有关。 钨灯丝SEM在日常工作条件下,用普通试样照相,能作到6nm分辨率就相当不易了。在此分辨率下,可以在5万倍以上拍出清晰照片。通常情况下,用3万倍对普通样品照相(如陶瓷、矿物),能给出清晰二次电子照片,就属高水平。 当研究某个样品,确定它的形貌特征时,要根据工作要求、它的表面特征和实际的预观察结果,选择适宜的放大倍数照相,不是放大倍数越大越好。在几万倍放大倍数下,很多样品表面缺乏细微形貌,难以得到清晰照片。高放大倍数时,取样面积很小,*为试样表面的很小一部分,缺乏代表性。内蒙古靠谱的扫描电镜拍照扫描电镜观察厚试样:其在观察厚试样时,能得到高的分辨率和比较真实的形貌。
扫描电镜以观察样品的表面形态为主。扫描电镜样品的制备,必须满足以下要求: ①保持完好的组织和细胞形态; ②充分暴露欲观察的部位; ③良好的导电性和较高的二次电子产额; ④保持充分干燥的状态。 某些含水量低且不易变形的生物材料,可以不经固定和干燥而在较低加速电压下直接观察,如动物毛发、昆虫、植物种子、花粉等,但图像质量差,而且观察和拍摄照片时须尽可能迅速。对大多数的生物材料,则应首先采用化学或物理方法固定、脱水和干燥,然后喷镀碳与金属以提高材料的导电性和二次电子产额。扫描电镜生物样品制备技术 常规扫描电镜对样品要求:必须是干燥的,不含水分或挥发性物质;具有一定机械强度,能耐受电子束轰击;具有导电性,被激发时能够产生足够的二次电子。生物材料特点:含水分多,质地柔软,机械强度小;组成元素的原子序数低,导电性差,激发后二次电子的产额较少。制样的任务:通过一系列处理,既要尽量完美地保存材料的固有形态,又要改良其物理性能,使其适合在电镜下观察成像 以下即为步骤方法、所需注意项目、以及操作中的使用技巧。
扫描电镜可以进行材料断口的分析。扫描电子显微镜的另一个重要特点是景深大,图象富有立体感。扫描电子显微镜的焦深比透射电子显微镜大10倍,比光学显微镜大几百倍。由于图象景深大,故所得扫描电子象富有立体感,具有三维形态,能够提供比其他显微镜多得多的信息,这个特点对使用者很有价值。扫描电子显微镜所显示的断口形貌从深层次、高景深的角度呈现材料断裂的本质,在教学、科研和生产中,有不可替代的作用,在材料断裂原因的分析、事故原因的分析以及工艺合理性的判定等方面是一个强有力的手段。观察细胞表面的立体形貌一扫描电镜就找英瀚斯生物。
扫描电镜进行动态观察。在扫描电子显微镜中,成象的信息主要是电子信息。根据近代的电子工业技术水平,即使高速变化的电子信息,也能毫不困难的及时接收、处理和储存,故可进行一些动态过程的观察。如果在样品室内装有加热、冷却、弯曲、拉伸和离子刻蚀等附件,则可以通过电视装置,观察相变、断裂等动态的变化过程。从试样表面形貌获得多方面资料。在扫描电子显微镜中,不*可以利用入射电子和试样相互作用产生各种信息来成象,而且可以通过信号处理方法,获得多种图象的特殊显示方法,还可以从试样的表面形貌获得多方面资料。因为扫描电子象不是同时记录的,它是分解为近百万个逐次依此记录构成的,因而使得扫描电子显微镜除了观察表面形貌外,还能进行成分和元素的分析,以及通过电子通道花样进行结晶学分析,选区尺寸可以从10μm到2μm。扫描电镜可得到有关物质微观形貌的信息;对x射线的采集,可得到物质化学成分的信息。广西细胞扫描电镜多少钱
扫描电子显微镜除了观察表面形貌外,还能进行成分和元素的分析,以及通过电子通道花样进行结晶学分析,。宁夏推荐的扫描电镜多少钱
扫描电镜样本处理:新鲜取材后用2.5%戊二醛固定液固定样本,4℃过夜放置,倒掉2.5%戊二醛固定液,用0.1M,pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15min;用1%的锇酸溶液固定样品1-2h;小心取出锇酸废液,用0.1M,pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15min;用梯度浓度(包括30%,50%,70%,80%,90%和95%五种浓度)的乙醇溶液对样品进行脱水处理,每种浓度处理15min,再用100%的乙醇处理两次,每次20 min。用乙醇与醋酸异戊酯的混合液(V/V=1/1)处理样品30min,再用纯醋酸异戊酯处理样品1h或放置过夜。临界点干燥。镀膜,观察。处理好的样品在扫描电镜中观察。宁夏推荐的扫描电镜多少钱
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