外周血外泌体提取试剂盒原理

外泌体生物学功能：1、在心血管系统中，据报道，源自人胚胎干细胞（ESC）的间充质干细胞（MSC）外泌体可减少小鼠和猪模型中的心肌缺血和再灌注损伤；2、在免疫系统中，据报道趋化因子受体CCR5通过外泌体在细胞之间转移是细胞人类免疫缺陷病毒传染的一种机制；3、在中枢的神经系统中，外泌体的作用是消除废物并介导大脑活动，从而阻止神经退行性疾病的发病机理；迄今为止，尚未完全发现调节外泌体-细胞结合的途径。然而，比较明显，其结合过程从外泌体识别受体细胞PM上的特定受体开始。膜受体的识别是外泌体细胞反应的基础，它可能活跃受体并随后导致相关信号通路的活跃，外泌体与PM融合或外泌体的内吞作用，从而导致蛋白质和RNA直接释放到受体细胞中。外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。外周血外泌体提取试剂盒原理

外泌体的脂质和蛋白质组成可以影响它们的药代动力学特性，它们的天然成分可能在提高生物利用度和减少不良反应方面发挥作用。除了它们的诊疗潜力，外泌体也有帮助疾病诊断的潜力。它们已经在所有的生物液体中被报道，并且通过生物液体取样(液体活组织检查)可以比较容易地获得外泌体的复杂货物的组成。基于外泌体的液体活检在病症和其他疾病的诊断和确定预后方面具有潜在的应用价值。疾病的进展和对诊疗的反应也可以通过外泌体的多组分分析来确定的。腹膜透析液外泌体circRNA测序外泌体可以通过多种方法给药，静脉内给药是较常用的途径。

外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合，有文献报道称RAB4,RAB5和RAB11主要出现在早期以及回收的核内体中，RAB7和RAB9主要出现在晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌体中富含具有外泌体膜交换以及融合作用的膜联蛋白（包括膜联蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9)）、热休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些细胞特异性的蛋白包括A33（结肠上皮细胞来源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素。

外泌体的生物发生和鉴定。液体和细胞外成分，如蛋白质、脂类、代谢物、小分子和离子，可以通过内吞作用和质膜内陷，与细胞表面蛋白一起进入细胞。由此产生的胞腔侧质膜芽的形成表现为质膜的外-内取向。这一出芽过程导致芽的形成可能与内质网(ER)、跨高尔基网络(TGN)和线粒体预先形成的早期核内体融合。ESEs也可以与ER和TGN融合，这可能解释了内吞物如何到达它们的。因此，一些ESEs可以包含膜和腔的成分，可以表示不同的起源。外泌体表面蛋白包括四聚体蛋白、整合蛋白、免疫调节蛋白等。外泌体可以包含不同类型的细胞表面蛋白、细胞内蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代谢物。对外泌体的分析和检测可以辅助疾病的早期诊断、疗效评价和预后分析。

磁珠免疫法分离外泌体：将针对目的抗原的抗体通过生物素-链霉亲和素连接到磁珠表面，然后将磁珠与样品共孵育，使外泌体特异性结合到磁珠上形成磁珠-外泌体复合物，再用蒸馏水或者PBS冲洗，结尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脱获得外泌体。该方法相对于ELISA的好处主要是，珠粒提供了更大的表面积来捕获外泌体，从而提高了分离效率。此外，使用磁珠时，样品起始体积没有上限，而基于微孔板的ELISA分析的较大样品体积为100μL，且ELISA洗脱杂质时容易造成孔间交叉污染。当将磁珠法与金标准外泌体分离方法进行比较时，磁珠法可分离出更纯净的外泌体，特异性高、速度更快，并且不需要昂贵的仪器。另外，与其他分离方法（如超速离心或超滤）相比，磁珠法不影响外泌体形态。但是采用磁珠法时，外泌体生物活性易受PH和盐浓度影响。建立外泌体分离、表征以及效价测定的标准化方法将是外泌体作为诊断和诊疗用途之前需要解决的问题。尿液外泌体提取试剂盒价钱

超离法是较常用的外泌体纯化手段。外周血外泌体提取试剂盒原理

外泌体的提取分离方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀，早先应用于从血清等样本中收集病毒，现在也被用来沉淀外泌体，其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题：比如纯度和回收率低，杂蛋白较多（假阳性），颗粒大小不均一，产生难以去除的聚合物，机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等，因此发表文章时易受质疑。2、试剂盒提取：近几年来，市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒，有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分，有的则采用空间排阻色谱法(SEC)进行分离纯化，也有的则利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。外周血外泌体提取试剂盒原理

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