加入20μteinaseK溶液,混匀。加入200μL缓冲液GB,充分颠倒混匀,在56℃放置14min(期间颠倒混合样品数次),溶液应变清亮,若未完全变清亮,延长裂解时间至完全变清亮。加人200μL无水乙醇,充分振荡混匀10s,此时可能会出现絮状沉淀。将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm离心30s,倒掉废液,将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入500μLGD(已加入无水乙醇),12,000rpm离心30s,弃废液,将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入600μLPW(已加入无水乙醇),12,000rpm离心30s,弃废液,将吸附柱CB3放回收集管中。12,000rpm(~13,400×g)离心2min。将吸附柱放置新的,以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。向吸附柱中悬空滴加50~200μL洗脱缓冲液,室温放置2~5分钟,12,000rpm(~13,400×g)离心2min,将溶液收集到离心管中,测定浓度及纯度后,取3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。用本发明和对照产品对8份样本同时进行荧光PCR扩增。结果如图6,本发明所有反应孔背景信号好、Ct值都在21~25之间,荧光扩增曲线呈典型的S型。口腔拭子是由手柄、连接杆和采样头组成。广西咽拭子口腔拭子批发厂
下面将结合实施例对本发明作进一步说明。实施例1一种可用于荧光PCR扩增的快速提取全血基因组的方法中的荧光PCR扩增反应液包括浓度或含量和组分如表1。将所述的荧光PCR扩增反应液对血液样本中的管家基因***DH进行荧光PCR扩增,方法如下:将**管颠倒混匀后,吸取100μL血液至,加入200μL的核酸释放剂,涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀;然后再加入200μL核酸释放剂,涡旋1min至沉淀完全散开,5000g离心30s,弃上清;向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的血液基因组DNA;取上清液3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。所述的荧光PCR扩增程序如下。步骤①:50℃,2min,循环1次。步骤②:95℃,5min,循环1次。步骤③:95℃15s,55℃30s(收集荧光),循环40次。结果分析:平行扩增的荧光定量PCR反应中,阴性对照无扩增,说明反应体系正常,无污染。用本发明处理了10份来源不同的人血液样本,然后用人管家基因***DH引物进行荧光PCR扩增检测,结果如图1所示。 广西咽拭子口腔拭子批发厂口腔拭子采样后在采集管标签上填写您的姓名把采集管装进自封袋中再在自封袋的正面标签处登记您的相关信息。
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本发明的特征在于:应用本发明的血液基因组DNA提取方法在10分钟内提取血液基因组可用于荧光PCR扩增检测,主要步骤如下。(1)将**管颠倒混匀后,吸取100μL血液或者吸取100μL口腔拭子样本保存液至,加入200μL的核酸释放剂,涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀。(2)将步骤(1)中得到的血液细胞沉淀中再加入200μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,至沉淀完全散开,然后5000g离心30s,弃上清。(口腔拭子样本则无需进行此步骤)。(3)向步骤(2)所获得的沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1~2min;室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的基因组DNA;所述的核酸释放剂组成为20mM~80mM的氢氧化钠溶液、~、~、~、~***钠、~3%甲酰胺;所述荧光PCR反应液组成为ROX、TaqMan探针、引物、dNTP、dUTP、UDG、BSA、聚合酶及缓冲液。附图说明图1为实例1检测的8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。图2~图5为实施例1提供的四份血液样本的三次平行实验的荧光扩增曲线图。图6为实施例2对比实例1提供的对8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。具体实施方式为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案。这款口腔拭子经过抗菌剂的特殊处理,防止微生物污染。
基因采样套装用途:基因检测,分子诊断,DNA采集,细胞学,基因检测采样,**基因,遗传学,公安DNA系统基因身份证,基因密码,疾病筛查分析研...查看全文全外显子基因突变检测采样盒全外显子基因突变检测采样盒,是贝瑞和康推出的一款便携式口腔脱落细胞采样盒,用于与乳腺AI、卵巢AI等发生密切相关的BRCA1/2基因突变检测的前期取样过程。该采样盒内置两套口腔拭子,口腔拭子采用自封袋单独包
检测口腔拭子采样流程指南口腔拭子采样方法(口腔脱落细胞)取样是简单、无痛、无创的DNA标本采集方法。
该方法适用于采集任何年龄段人群的DNA样本。 口腔拭子应该持续15s而不产生长久变形或者折断的现象。广西咽拭子口腔拭子批发厂
在使用口腔拭子**0分钟,记得不要进食喝水用药、也不要吸YAN喝酒,以免影响采样操作。广西咽拭子口腔拭子批发厂
产品简介:口腔拭子DNA快速提取试剂盒专门为从口腔拭子刮取的黏膜组织和浸润的唾液中提取基因组DNA而设计,能有效回收>50 bp已降解的DNA,包括降解的基因组DNA,线粒体DNA和DNA等。本试剂盒使用DNA吸附柱-C4回收DNA,很小洗脱体积为10 μl。原理:Buffer SL与蛋白酶K裂解细胞释放DNA,Buffer GBR调整结合条件,材料选择性吸附DNA,洗涤去除蛋白和盐,低盐溶液洗脱DNA。
建议采样方式:使用吸水性强的棉质或无纺布材质的口腔拭子,含口中充分浸润唾液(唾液中DNA含量丰富)在脸颊内测刮10-20次。
产品使用说明书:口腔拭子DNA快速提取试剂盒更多产品信息请关注:
产品特点:试剂盒包含的Buffer SL可作为样品保护液(如使用自备的保护液,请联系技术支持);
预期产量为2-5 μg DNA/ 100 μl唾液(与拭子材质和采样方式有关);适合处理无纺布和棉质的拭子,不适合处理海绵材质的拭子。
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