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医学实验外包,Co-IP检测介绍。免疫共沉淀(Co- Immunoprecipitation, Co-IP)是利用抗原和抗体的特异性结合以及细菌的Protein A或G特异性地结合到免疫球蛋白的Fc片段的现象开发出来的方法。其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Agarose珠上的Protein A或G,若细胞中有与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“兴趣蛋白—抗性蛋白抗体—Protein A或G—Agarose珠”,经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,复合物又被分开。然后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

医学实验外包,circRNA Pulldown(环状RNA)介绍:使用生物素RNA探针,与细胞裂解液孵育,形成探针-circRNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与裂解液中的其他成分分离。磁珠复合物洗脱后,可通过western blot实验或质谱实验检测特定的circRNA结合蛋白是否与circRNA相互作用。RNA pull-down实验就是先将RNA进行标记(如生物素探针标记),再与细胞裂解液共同孵育,从而形成RNA-蛋白质复合物,之后再分离复合物得到蛋白质,通过western blot 或mass Spectrometry检测蛋白质的技术。目前RNA pull-down技术已成为研究miRNA、lncRNA与相互作用蛋白的主要技术手段之一。医学实验外包-价格低-周期短-数据清晰。

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