1.细胞培养基的种类按照细胞培养基的发展历史,细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成,它的作用是维持细胞渗透压平衡,保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。几种常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's与Hank's的一个主要区别是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因为Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成份,参与细胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免细胞结团。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基础溶液,前者缓冲能力较弱,适合于密闭培养;后者缓冲能力较强,适合于5%CO2的培养条件。天然培养基指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基,如血浆、血清、鸡胚浸出液等。其优点是营养成分丰富,培养效果良好,但缺点是成分复杂,来源受限且制作过程复杂、批间差异大。目前使用的天然培养基是血清,另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物。DMEM培养基**初设计葡萄糖含量为1000mg/L(低糖型),后来又发展出葡萄糖含量为4500mg/L(高糖型)。云南RPMI-1640细胞培养基源头直供
Leibovitz’sL-15培养基的缓冲系统由磷酸盐和游离碱基氨基酸组成,代替了传统的碳酸氢钠缓冲系统,同时,用半乳糖和**酸钠代替葡萄糖可以防止酸性代谢副产物的形成,有助于维持培养液PH的稳定,适合用于非CO2平衡环境的细胞培养。Leibovitz’sL-15培养基适用于猴肾细胞和HEP-2的培养、原代(如胚胎和成人组织)细胞分离、多种病毒的培养以及神经元的培养等。青霉素-链霉素混合液通常也被称为“双抗”,是体外培养中为预防微生物污染常用的***,其中,青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成,对革兰阳性菌特别有效;而链霉素能够与细菌核糖体30S亚单位结合,抑制细菌蛋白质的合成,对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有效,但对革兰氏阴性菌特别有效。青霉素和链霉素联合使用可以预防绝大部分的细菌污染。本产品含有多类细胞培养所需的氨基酸、维生素、无机盐等多种成分,但不含蛋白质、脂类或任何生长因子,故此产品需搭配血清或无血清添加物使用。 甘肃实验细胞培养基供应商MCDB131是MCDB培养基的一种,是由Knedler和Ham设计开发出来的,初用于培养人微血管内皮细胞(HMVEC)。
Waymouth’sMB752/1培养基是由CharityWaymouth研发出来的化学限定培养基,**初用于研究小鼠L株亚细胞系L929细胞在无血清条件下的营养、代谢和生长特性的研究。
Waymouth’sMB752/1培养基现已被拓展用于完整***以及其他许多细胞系的培养,如*细胞系的培养。
华晨阳所生产的细胞培养基含有多类细胞培养所需的氨基酸、维生素、无机盐等多种成分,但不含蛋白质、脂类或任何生长因子,有些细胞的培养可能需要搭配血清使用。
注意事项
本产品经过滤除菌,使用时应注意无菌操作,避免污染;
为保持本产品的比较好使用效果,请勿进行冻融处理;
本产品用于科研或进一步研究使用,不用于诊断疗。
培养液的渗透压是一个非常重要的因素,细胞通常可耐受260mOsm/kg~320mOsm/kg。标准培养液的渗透压在此范围内波动。特别注意:向培养液中加入其它物质有可能会明显改变培养液的渗透压,特别是溶于强酸或强碱中的物质。向培养液中添加HEPES时需按以下方法调节钠离子浓度。缓冲系统大多数细胞所需pH在-。但是,细胞培养适pH值随培养的细胞种类不同而不同。成纤维细胞喜欢较高pH(-),而传代转化细胞系则需要偏酸pH(-)。由于多数培养液靠碳酸氢钠(NaHCO3)与CO2体系进行缓冲,因此,气相中的CO2浓度应与培养液中碳酸氢钠浓度相平衡。如果气相或培养箱空气中CO2浓度设定在5%,培养液中NaHCO3的加入量为;如果CO2浓度维持在10%,培养液中NaHCO3的加入量为。细胞培养瓶盖不应拧得太紧,以保证气体交换。HEPES是一种非离子缓冲液,在pH-范围内具有较好的缓冲能力,但是非常昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠()共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。在这种培养条件下,细胞培养瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色。MEM培养基含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种维生素,主用于贴壁细胞培养,修改后也可用于其他细胞培养。
RPMI-1640细胞培养基RPMI-1640是Moore等人开发出来的,RPMI是该研究所开发的一类细胞培养基,1640是培养基代号。
RPMI-1640是改进型的McCoy‘s5A培养基,使用碳酸氢盐缓冲系统,与大多数哺乳动物细胞培养基不同的是其典型的PH8的配方。
RPMI-1640培养基常初是为淋巴细胞培养专门设计的,现在已广泛应用于各种正常细胞和ai细胞的培养,包括HeLa细胞、Jurkat细胞、MCF-7细胞、PC12细胞、PBMC细胞、星形胶质细胞和ai细胞,是使用常为广的培养基之一。
RPMIRPMI1640培养基相比其他培养基之所以具有独特的效果,是因为其中含有还原剂谷胱甘肽和高浓度的维生素。RPMI1640培养基含有生物素、维生素B12以及PABA,这些成分是Eagle’sMEM和DMEM所不具备的。针对广的细胞培养应用,我们提供多种组分的RPMI1640改良培养基。
DMEM/F12培养基是在DMEM培养基的基础上,添加F12培养基中更为丰富的营养成分。湖南实验细胞培养基批发厂
L-谷氨酰胺是细胞培养中所必需的一种营养元素,但其在溶液中不稳定,会自发降解,不含L-谷氨酰胺的培养基。云南RPMI-1640细胞培养基源头直供
Leibovitz’sL-15培养基的缓冲系统由磷酸盐和游离碱基氨基酸组成,代替了传统的碳酸氢钠缓冲系统,同时,用半乳糖和**酸钠代替葡萄糖可以防止酸性代谢副产物的形成,有助于维持培养液PH的稳定,适合用于非CO2平衡环境的细胞培养。Leibovitz’sL-15培养基适用于猴肾细胞和HEP-2的培养、原代(如胚胎和成人组织)细胞分离、多种病毒的培养以及神经元的培养等。NEAA(非必须氨基酸),是在MEM培养基的基础上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天(门)冬酰胺、L-天(门)冬氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸和甘氨酸7种NEAA,能降低细胞培养时细胞自身生产非必须氨基酸的副作用,有效促进细胞增殖代谢。酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂,用以持续监测培养液的酸碱度,在低PH值时酚红使培养液呈黄色,而较高的PH值时使培养液呈紫色,PH值~,适合细胞培养。但酚红也有一些缺点,研究表明酚红可以模拟固醇类(特别是雌)的作用,因此在用到雌敏感的细胞时(如乳腺组织),较好使用不含酚红的培养基。酚红会干扰流式细胞分析时候的检测。此外,一些无血清培养基的配方中若存在酚红会干扰钠-钾平衡。 云南RPMI-1640细胞培养基源头直供
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