河南CD63外泌体慢病毒

外泌体作为疾病诊断标志物的潜在应用依赖于基于外泌体的药物递送系统的技术突破，要将其用于临床治理，外泌体的大规模工业化生产面临很大的挑战。外泌体（exosome）是细胞分泌囊泡（extracellularvesicles）的一种亚型，存在于生物体液中，并参与多种生理和病理过程。外泌体被认为是细胞间通信的一种新机制，允许细胞交换蛋白质、脂质和遗传物质。过去，细胞分泌的外泌体一度被认为只是参与废物排泄；现在，随着高通量蛋白质组学和基因组学的发展，外泌体被宽泛认为是生物体内细胞间短距离和长距离交流的高度保守的途径，这种细胞间通信对于正常细胞和瘤细胞都是非常重要的。外泌体并作为症状早期诊断技术，应用于与症状进展相关的研究。河南CD63外泌体慢病毒

获得囊泡粒径分布的两种方法动态光散射(DLS)和纳米颗粒跟踪分析(NTA)都被广fan应用于外泌体颗粒数目和粒径分布的测量，但两种方法也各有不足。动态光散射法中散射光强度依赖于颗粒质量(体积)，混合体系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)将严重影响测量结果，因此动态光散射法更适用于单分散体系。而且动态光散射法所得的结果强烈依赖于所应用的数学算法。而采用纳米颗粒跟踪分析仪对不同粒径范围的囊泡进行检测时，为了得到准确的浓度和粒径信息，需要根据所要测量的颗粒粒径范围对仪器分别校准，操作繁琐。受检测灵敏度所限，纳米颗粒跟踪分析仪适用于粒径范围50nm～1μm的颗粒，粒径小于50nm的外泌体无法检测。除此之外，两种方法都依赖光散射和粒子的布朗运动进行分析，难以区分合成的纳米材料、大蛋白质聚合体和生物囊泡。胸水外泌体Dil近些年关于外泌体研究很普遍。

寻找肝脏疾病的新型分子标志物一直是研究热点，也是难点。不同肝脏疾病中，细胞分泌的外泌体所携带的核酸和蛋白组分之间存在差异。这些不同生理状态下外泌体所携带的特异性蛋白分子、miRNA等，是潜在的分子诊断和预后标志物。肝细胞患者中，血清外泌体miR-21、-18a、-221、-222和miR-224明显上升，miR-101、-106b、-122和miR-195明显下降。而HCC患者肝移植复发后，血清外泌体miR-718水平明显下降。除外泌体外，微泡也有可能作为新型标志物，研究发现HCV患病者中CD4+和CD8+T细胞来源的微泡含量上升；而肝脏干细胞分泌的微泡中多种miRNAs上调。

利用蛋白质免疫印迹和酶联免疫吸附分析技术可以对外泌体标志性蛋白质进行定性定量分析。其中蛋白免疫印迹是外泌体的经典表征手段之一，操作时往往需要细胞裂解液作为阴性对照。常用的外泌体标志性蛋白质包括四跨膜蛋白质CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡诱导因子6相互作用蛋白(Alix)等，内参蛋白质可以是肌动蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脱氢酶，阴性对照蛋白可以是阻抑素(PHB，线粒体标志蛋白)或钙联结蛋白Calnexin。在酶联免疫吸附析法中，外泌体裂解液通过固载有抗体的固相基质，随后与检测抗体共孵育。两种方法均存在操作繁琐、耗时长的问题，相比较而言，酶联免疫吸附分析法比蛋白质免疫印迹法更加快速，适用于高通量分析。在从体液中提取外泌体后，体液可长期稳定保存。

随着科学研究的不断深入，目前已经发现外泌体是由通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成多泡内涵体，多泡内涵体再与细胞膜融合后，释放到细胞外基质中的一种直径约30~120nm的膜性囊泡。外泌体介导瘤细胞的化疗抵抗。在瘤的治理过程中经常会出现药物耐受的情况，这会导致化疗失败，在这和过程中外泌体以多种途径参与了化疗抵抗这一过程。通常，发生EMT过程的瘤细胞可获得抵抗凋亡能力，而抵抗凋亡通常使瘤表现为化疗抵抗。瘤细胞来源的外泌体能通过传递相关的组织因子(如VEGF、TGF2β)介导细胞发生EMT，从而增加瘤细胞的化疗抵抗能力。外泌体又存在检测时需使用大量外泌体和难以检测到低表达水平的标记蛋白。血浆提取试剂盒生产厂家

外泌体具有良好的生物兼容性、稳定性和内在靶向性，使其在药物递送方向大有潜力。河南CD63外泌体慢病毒

外泌体特指直径在30-150nm的囊泡，其主要来源于细胞内多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9）、热休克蛋白家族（HSP60,HSP70和HSP90），本示踪病毒使用CD63作为生物标记，通过将CD63与荧光蛋白偶联，带荧光的膜蛋白会在表达至外泌体膜上，便于后续进行、观察内化或其他实验。慢病毒载体的构建原理就是将HIV21基因组中的顺式作用元件(如包装信号、长末端重复序列)和编码反式作用蛋白的序列进行分离。河南CD63外泌体慢病毒

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