从本节开始,我们开始对膜进行深入讨论和谈一些应用技巧。1. 蛋白与膜的结合原理。蛋白与膜的结合原理, 已知的结合力包括疏水作用力\H键\静电作用力等,确切的结合原理并不明确,主要靠假说来支撑.主要有两种假说:1 首先两者靠静电作用力结合, 然后靠H键和疏水作用来维持长时间结合.2首先两者靠疏水作用结合, 然后靠静电作用来维持长时间结合。两条假说, 都表明其结合过程分为两步, 首先结合和后面长时间结合.由于结合原理的不明确性, 导致在这方面的工作非常依赖实践经验.2. 膜对结合的影响。 有些技术人员倾向使用膜孔径来区分不同的膜,但是请注意这只只只限于同一厂家的产品,如果是不同厂家的产品,这种比较是无意义的. 膜孔径与层析速度的关系,已在上文描述。PVDF转印膜使用方便且操作简单。山东热升华转印膜售价
硝酸纤维素膜(NC膜)在胶体金试纸中用做C/T线的承载体,同时也是免疫反应的发生处。硝酸纤维素膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物,在低离子转移缓冲液的环境下,硝酸纤维素膜会吸附蛋白质,但其作用机理目前仍不能确定,凭借这一特性,硝酸纤维素膜在生物学试验中应用普遍,是较重要的耗材之一。硝酸纤维素膜(简称NC膜)具有高蛋白结合能力和高机械强度、毛细管率与厚度一致、使用中不需要甲醇预湿等性能,是胶体金试纸中用做C/T线的承载体,同时也是免疫反应试验中较重要的耗材。另外,硝酸纤维素膜对于诊断层析试纸条的性能表现非常重要,是形成免疫复合物的固相支撑介质,用户直接在膜上判读结果,病毒病情爆发后多用于病毒检测试剂。绍兴Northern 印迹转印膜生产商膜材料在极端环境下仍能够始终保持稳定。
C/T线出线时间, 其他试验条件相同情况下, 记录和比较C/T线出现时间是否与对照有差异。灵敏度, 比较不同样本浓度情况下, T线的变化是否和对照组同. 一般每批次膜取前端一段用来测试即可. 由于制造过程的不均一性, 不同批号的灵敏度会有一定差异, 当大批量使用时, 这种差异影响是非常大的, 那么就要按照灵敏度表现将不同批号的膜进行分类. 在膜的STOCK中要能够轻易的分辨出来. 当进入后期生产调用时, 就能根据这些分类, 按照订单要求取用不同批号的膜, 或者用强灵敏度的原料和差灵敏度的膜来搭配。关于膜的批内差. 批内差是肯定存在的,只是差距大小的问题,依据一般的测试条件是很困难获得详细的数值,因为你不可能对每一卷膜的每一段都做详细的测试.。
大家较关心的可能就是希望获得一个性能优良的配方,包括缓冲液,封闭液等等处理溶液配方.其实我也无法提供给你一个万用配方清单. 因为不同的反应体系需要不同的配方来支持, 而不同机构的反应体系又有差异. 想获”鱼”先学”渔”. 为了不误导大家,我在下面涉及到配方的问题上,只提供思路,具体配方请自己摸索.缓冲液的构成一般是: PBS(或其他缓冲体系)+作用物质(针对某一特定问题)+PH调整. 我在参考过以前的各种资料后,个人意见为配方原则为宜简不宜繁,根据自己的需要添加作用物质,原来的很多需要添加的作用物质,由于膜制造技术的改进已经不再需要.推荐的缓冲体系为0.01M PBS PH7-7.2, 该缓冲体系对多种抗原抗体都有良好的适应性。PVDF转印膜材料能够在复杂工艺和高温环境下保持稳定。
我们并没有那么多选择. 经过使用实践, 各供应商一般都只提供两个型号, 就是135s和180s. 虽然看到有些厂家的产品目录上型号种类繁多,但这两个型号的定货量就占了95%以上, 其他型号供货上也就远不如这两个型号来得顺利. 135s一般用在双抗体夹心法, 180s一般用在竞争法. 你所要做的是,先选择其中的一个型号, 然后比较不同供应商同一个型号的差异, 由于前面说的添加配方与你的试验条件配合的不同,这个差异可能大也可能小. 具体要根据试验结果来确定之后的选择。我个人不建议地毯式的测试不同规格/不同厂家的膜, 这样成本高, 成功的几率也小。膜材料可以灵活搭配不同的颜色和纹理。杭州Northern 印迹转印膜采购
膜材料易于裁剪、涂布和吸附。山东热升华转印膜售价
硝酸纤维素膜/PVDF膜:用于蛋白免疫印迹的固相载体有多种,硝酸纤维素膜及PVDF(聚亚乙烯双氧化物)膜较为常用。硝酸纤维素膜具有结合 能力强,膜不需要活化,背景浅,能进行多次免疫检测并且功能基团寿命长等优点,但极易破碎不易操作。PVDF膜在制备多肽供蛋白质化学分析中较为常用。它 具有较强的蛋白质结合能力和高信噪比,所以不会因为重复使用探针而使蛋白质丢失。另外,膜的开放孔结构使其更容易与被吸附的蛋白质结合。可用于Western杂交、dot/slot 杂交、蛋白质测序、以及MS分析。适用于Southern/Northern/Dot/Slot Blot/Colony Lift实验和Western、蛋白质测序以及MS分析。山东热升华转印膜售价
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