不同秒数的膜对反应有什么影响呢?首先,我们分析一下液体在膜上的运动过程。一张长度为4cm的膜, 每隔1cm做一个标记, 当液体运动过标记处时记录时间点. 那么你将会发现液体在膜上的运动是呈减速前行的。而两张不同秒数的膜(例如135s, 180s)在同一时间标记点处的运动速度不同.这个试验用清水做不好观察,可以考虑用色素水溶液,非常明显。那么从这个试验可以看出,在通过同一T线喷点位置时,金溶液通过的速度是快速膜大于慢速膜。那么通过速度越快和包被在T线的物质反应时间也就越短,读数快,那么灵敏度也就越低。反之,反应时间长,读数慢,也就灵敏度高。同时还有一个问题是,反应时间越长,发生非特异性结合的可能性就越大,所以过长时间的反应不一定就能够真正的提升灵敏度。所以这里就有一个读数时间/反应灵敏度/非特异性结合的均衡。膜材料易于加工和安装。江苏带电尼龙膜选择
有两种点样方式,划膜式和非接触点膜式.非接触点膜式优于划膜式,进口划膜式优于国产划膜式。因划膜式为软管将抗体划到膜表面,而膜本身的物理性质为软脆,划管会在其表面留下印痕.进口的划膜机由于使用的材料和控制系统较好,所以留下的划痕较轻,而国产仪器较差,留下的划痕也就比较严重. 划痕容易对层析的金标复合物形成阻力,导致假阳性. 同时容易出现跑板时在T线位置出现若有若无一条细线(鬼线),而跑板结束后鬼线消失的奇怪现象。膜的宽度一般有18mm(or 20mm)和25mm两种, 分别使用在做测试条和做测试板上.然而,不同的T线点样位置将带来不同的灵敏度. 点样位置上移,金标复合物通过T线位置时速度变慢,反应时间增加,灵敏度升高. 反之灵敏度降低. 这个方法可以用来改变灵敏度和消除假阳性。重庆蛋白吸附转印膜厂家排名PVDF转印膜材料能够抵挡日常的化学腐蚀。
硝酸纤维素膜(NC膜)在胶体金试纸中用做C/T线的承载体,同时也是免疫反应的发生处。硝酸纤维素膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物,在低离子转移缓冲液的环境下,硝酸纤维素膜会吸附蛋白质,但其作用机理目前仍不能确定,凭借这一特性,硝酸纤维素膜在生物学试验中应用普遍,是较重要的耗材之一。硝酸纤维素膜(简称NC膜)具有高蛋白结合能力和高机械强度、毛细管率与厚度一致、使用中不需要甲醇预湿等性能,是胶体金试纸中用做C/T线的承载体,同时也是免疫反应试验中较重要的耗材。另外,硝酸纤维素膜对于诊断层析试纸条的性能表现非常重要,是形成免疫复合物的固相支撑介质,用户直接在膜上判读结果,病毒病情爆发后多用于病毒检测试剂。
安装转印槽子:将滤纸和海绵放入电印迹缓冲液中浸泡一下,依次按照海绵、滤纸、PVDF膜、凝胶、滤纸、海绵的次序将电印迹夹层装好,并放入小型电转槽中;电印迹转移:于转印条件下(50V,100-170mA)室温进行电印迹转移,转移时间一般为5-2小时(根据蛋白质具体分子量大小而定);PVDF膜染色前处理:取出PVDF膜并用去离子水漂洗,用甲醇浸泡数秒钟,然后进行染色;膜染色:染色剂30-50秒(切勿超过1分钟),50%甲醇脱色(勤换脱色液),之后用去离子水充分洗涤后晾干即可。转印膜是一种经济型选择,用于核酸和蛋白质印迹实验方案。这种硝化纤维素转印膜,是Southern、colony/plaque以及蛋白质实验方案中较初使用的膜。NC HATF所含的混合纤维素酯基质,不含在细胞生长过程中会干扰细胞壁完整性的表面活性剂。这些膜用于colony lifts。NC HAHY所含的混合纤维素酯基质,所带的表面活性剂能够增强可湿性以及转印过程中的处理能力。两种膜对核酸和蛋白质都具有高吸附容量。适用于常规转印。膜材料能够满足高效率和高质量的印刷需求。
我公司提供完整的转印解决方案,纯硝酸纤维素膜和带支撑的MCE膜,纯PVDF和带支撑的PVDF膜,带支撑的中性尼龙膜和带电尼龙膜。迈恩硝化纤维素转印膜可用于所有蛋白质印迹或免疫印迹应用,其高灵敏度确保了转印的优异结果,特别是蛋白质印迹。迈恩PVDF膜是天然疏水的,无支撑的转印膜;它具有高结合力,可防止蛋白质穿过膜,低背景值可提供出色的信噪比;它还具有优异的拉伸强度,可防止其开裂、撕裂、断裂或卷曲;该膜还具有普遍的化学相容性,当与常用燃料一起使用时(如酰胺黑、胶体金、考马斯亮蓝、印度墨水和丽春红),当使用高浓度甲醇用于脱色时,PVDF不会降解、变形或收缩。其优越的强度,高结合力和化学相容性使迈恩的PVDF转印膜成为蛋白质印迹、免疫印迹、固相分析和菌斑转移的理想选择。膜材料能够保证高效率和高质量。江苏带电尼龙膜选择
PVDF转印膜的使用寿命长,不易退色和剥落。江苏带电尼龙膜选择
大家较关心的可能就是希望获得一个性能优良的配方,包括缓冲液,封闭液等等处理溶液配方.其实我也无法提供给你一个万用配方清单. 因为不同的反应体系需要不同的配方来支持, 而不同机构的反应体系又有差异. 想获”鱼”先学”渔”. 为了不误导大家,我在下面涉及到配方的问题上,只提供思路,具体配方请自己摸索.缓冲液的构成一般是: PBS(或其他缓冲体系)+作用物质(针对某一特定问题)+PH调整. 我在参考过以前的各种资料后,个人意见为配方原则为宜简不宜繁,根据自己的需要添加作用物质,原来的很多需要添加的作用物质,由于膜制造技术的改进已经不再需要.推荐的缓冲体系为0.01M PBS PH7-7.2, 该缓冲体系对多种抗原抗体都有良好的适应性。江苏带电尼龙膜选择
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