干细胞外泌体透射电镜检测

除了siRNA和miRNA，mRNA也可以作为“货物”被外泌体运输。研究表明，在移植了人肺中流的小鼠模型的血液和唾液中分离出来的外泌体含有中流细胞特异性的mRNA，而被爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)感ran的细胞分泌的外泌体中也含有EBV的潜伏期mRNA。因而，外泌体的这种运载mRNA的能力引起了中流研究者们的注意。近期，Saydam等率先报道了利用多泡体(含外泌体)负载mRNA/蛋白进行中流zhiliao的研究。研究者们利用脂质体2000或病毒载体对HEK-293细胞进行转染，使其分泌的多泡体含有mRNA/蛋白(CD-UPRTEGFP，其中CD:胞嘧啶脱氨酶;UPＲT:尿嘧啶磷酸核糖转移酶;EGFP:增强型绿色荧光蛋白)。将此多泡体注射至小鼠的神经鞘瘤处，并辅助注射5氟尿嘧啶(5-FC)，神经鞘瘤的增长被明显抑制。关于外泌体相关的实验技术，关于需要改进的课题存在很多。干细胞外泌体透射电镜检测

外泌体是细胞在特定条件下分泌的小囊泡，是细胞间传递信号，相互沟通和影响的重要工具，它可以直接进入受体细胞影响细胞功能。外泌体PK细胞因子：磷脂双层膜结构，可保护内容物，包含多种细胞因子可直接进入受体细胞。外泌体PK干细胞：无免疫排斥，体积小穿透力强，可避免伦理道德争议。年轻的脂肪组织中提取外泌体，在特定条件下扩大培养出具有调控毛发根部的囊干细胞功能的外泌体，包含多种细胞因子的外泌体直接进入毛发根部的囊细胞，恢复毛发根部的囊干细胞的正常功能。干细胞外泌体透射电镜检测超速离心是从生物体液或细胞上清分离外泌体的金标准方法。

外泌体中存在着某些特定的蛋白质、脂质和多糖,基于抗原–抗体特异性识别和结合作用原理,可将外泌体从其他组分中分离出来。四次跨膜蛋白家族、脂膜、膜联蛋白、上皮细胞黏附分子或肝素等都可以作为抗原,而捕获外泌体的抗体可以附着在平板、磁珠、二氧化硅、树脂、膜亲和过滤器、纤维素滤膜、聚酰氨基胺树状聚合物表面和微流控器件上。常用方法有酶联免疫吸附法和磁珠法等。酶联免疫吸附法使用聚苯乙烯微孔板作为抗体附着介质,其结果用吸光度值表示,该方法可以快速分析已知表面生物标志物的表达,也可以瞬时读出外泌体的产量和特异性。磁珠法多使用共价包覆链霉亲和素的磁珠,与样品一起孵育后可通过磁泳将被结合的外泌体从样品组分中分离出来。鉴于微米级磁珠可赋予更大的接触面积,该方法不jin具有高度特异性,还具有比超速离心更高的外泌体产率。

外泌体的检测,在其他消化道系统瘤的诊疗中,存在着巨大的潜在价值.如:食管鳞状细胞病的研究中发现,miRNA-21在外泌体中的高表达,表达水平可100%反应瘤水平,外泌体miRNA-21的高表达往往预示着宽泛浸润与复发[36].十二指肠病的研究中,发现转移性十二指肠病细胞分泌的外泌体富含PABP1蛋白,细胞不能耐受PABP在胞内的大量囤积,通过外泌体PABP1蛋白排出胞外是转移性十二指肠病细胞所具有的特性,外泌体PABP1是转移性十二指肠病的分子标志物,此发现不只在转移性十二指肠病的诊断上提供了价值,也为转移性十二指肠病的治理提供了新的思路。有望在外泌体和微囊泡生理功能的分析研究上起重大贡献。

在血液和大多数体液（如尿液、脑脊液、唾液、胸腹腔积液、羊水和乳汁等）中均可检测到外泌体。血液外泌体的检测通常采用EDTA抗凝血分离的血浆，miRNA等一些微小RNA则采用血清样本。泌尿系统中存在大量的RNA水解酶可降解尿液中的裸miRNAs，但外泌体外膜则可帮助RNA免于被降解，因此研究尿液外泌体miRNAs更具有应用价值。相较于血清中相关miRNA的水平，脑脊液外泌体中的miR-21可作为胶质瘤诊断和预后的指标，特别对预测中流复发或转移具有价值。唾液样本在安静状态下主要来源于舌下腺和颌下腺，刺激状态下则主要来源于腮腺。不同类别的外泌体囊泡有三个征：表面具涂层的膜泡、内含纤维的膜泡、电子致密囊泡。细胞外泌体原液的特点

外泌体提纯方法中，超速离心法和聚合物沉淀法（市售试剂盒）混入多种杂质。干细胞外泌体透射电镜检测

外泌体大小不均可能是由于MVB的限制膜不均匀内陷，导致流体和固体的总含量不同；细胞的微环境和固有的生物学特性可能会影响外显体的含量及其生物学标记，如乳腺病细胞及其外泌体的蛋白质组可以显示来源细胞是上皮样细胞还是间充质样细胞；由于细胞表面受体表达的不同，外泌体对受体细胞的影响可能不同，可能诱导细胞存活，也可能诱导凋亡，或诱导免疫调节等；异质性也可以基于外泌体起源的组织，包括它们是否来自病细胞，瘤细胞产生的外泌体传递致瘤miRNAs明显促进瘤细胞增殖。干细胞外泌体透射电镜检测

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