晚期核内体与外泌体

要使外泌体在临床上得以更加广fan的应用，仍然需要更加深入的研究:(1)外泌体的提纯方式主要是超速离心，这种提纯方式效率较低，耗费时间长并且相对昂贵，并不适宜在临床上应用。(2)外泌体虽然具有一定的靶向性，但这种靶向性较弱，不足以解决中流的靶向zhiliao问题。通过在外泌体表面表达特异性肽的方法可以为上述问题的解决提供较为有效的途径。(3)在外泌体的载药fang式方面，现在常用的电穿孔法虽更具优势，但往往会对外泌体或药物的完整性产生影响，转染外泌体法不能保证基因类药物全部进入外泌体内而不是粘附在外泌体表面，存在着安全隐患。(4)外泌体作为细胞分泌物质，其本身可调性并不如脂质体以及聚合物基药物载体。血液中的成纤维细胞所释放的外泌体，可以促进角质形成细胞的移动和增殖以及血管新生来促进伤口愈合。晚期核内体与外泌体

外泌体是由细胞细胞质内的晚期内泡小体以膜融合的方式通过胞吐方式主动分泌到细胞外环境的一种直径30-100nm的微型囊泡，其形态规则，呈圆形或椭圆形杯状结构，不同类型细胞分泌的外泌体具有很多共性，包括膜上富含脂筏及丰富的跨膜蛋白，如四次跨膜蛋白家族成员CD63、CD81等，表面为类似于细胞膜的脂质双分子层，具有一定的疏水性。外泌体能够携带微小RNA(microRNAs,miRNAs)、RNA、蛋白质等生物活性分子，并在细胞外环境稳定存在，而且通过传递供体细胞信息，调节靶细胞的代谢通路。外泌体可由多种类型细胞分泌，妊娠期母体血清中存在表达胎盘碱性磷酸酶（placentalalkalinephosphatase,）的胎盘来源外泌体，并且在妊娠中发挥重要的作用。江西外泌体miRNA芯片外泌体观察到它们可以在体内刺激免疫应答。

外泌体运输的基因类药物也可以是miRNA，miRNA是一类非编码的内源性RNA，主要用于调节转录后的基因表达。miRNA主要通过与mRNA的未翻译的区域(UTRs)结合起到抑制基因表达和降解mRNA的作用。与siRNA不同，miRNA抑制mRNA的表达不需要完美的碱基配对，因此每种miRNA可以抑制多种蛋白质的表达，而每种siRNA只针对一种蛋白质。miRNA的运载也存在着种种挑战:miRNA体内稳定性差、生物分布不理想、易被体内酶降解以及容易引起副反应等。越来越多的研究表明外泌体也是体内运载miRNA的优良载体，并且利用外泌体运输miRNA的zhiliao方法已经在许多疾病模型中得以应用。

各种细胞粘着分子在外泌体膜表面表达，由其决定外泌体被运输往哪一种细胞，期望开发利用该特征的新型DDS。外泌体在体液中十分稳定，同时外囊泡所含的蛋白质和RNA被外泌体的脂质双层膜所包被也不会分解。另外在从体液中提取外泌体后，体液可长期稳定保存，因此外泌体有望成为临床检测的新型疾病生物标记。外泌体与各种疾病的相关性被检测出，特别是血液中释放的病细胞来源的外泌体，其与正常细胞来源外泌体在结构分子上的差异倍受瞩目，并作为症状早期诊断技术，应用于与症状进展相关的研究。甚至人们期望将尿液中的外泌体作为肾脏、前列腺疾病、膀胱疾病的新型诊断标记，髓液中的外泌体作为脑内种瘤和神经退行性疾病的新型标记物。外泌体作为核酸分子的药物载体主要用于基因治理。

外泌体中包含的mRNAs和miRNAs在进入受体细胞后仍具有翻译蛋白质、促进病毒感ran等功能。据估计，单个外泌体含有约≤100拷贝数的蛋白质和≤10000拷贝数的核苷酸。不同细胞来源的外泌体中既包含与细胞形成、结构和物质转运相关的共有成分，也包含与来源细胞的生物功能相关的特异分子。如B淋巴细胞、树突状细胞、肥大细胞和肠上皮细胞来源的外泌体含有大量的主要组织相容性复合体蛋白质MHCclassⅡ和MHCclassⅠ，血小板和T细胞来源的外泌体则包含诸如血管性血友病因子、穿孔素和颗粒酶等特殊蛋白质，而ai细胞来源的外泌体表面可能含有中流特异的蛋白质分子。这类特异分子在外泌体介导细胞信号转导、参与生理病理过程中发挥至关重要的作用。蛋白质分子在外泌体信号传递过程中起到了非常重要的作用。晚期核内体与外泌体

从症状患者树突状细胞释放的外泌体中，含有各种症状细胞来源的蛋白质。晚期核内体与外泌体

目前，提取外泌体的方法主要有超速离心法、PEG沉淀法，但这些方法混有非常多的杂质，必须慎重分析得到的是否是外泌体。超速离心法存在操作繁杂、回收量不稳定，不能用于定量分析、必须使用昂贵的超速离心机、无法进行多样品分析等问题。因此外泌体研究相对困难，需要尽快开发操作简单、可提取高纯度外泌体的技术。因此，日本和光着眼于巨噬细胞的外泌体受体Tim4蛋白，制备Tim4细胞外域与磁珠结合的“Tim4磁珠”。Tim4通过磷酯酰丝氨酸（PS）法特异性结合Tim4蛋白和磁珠，再经过含有EDTA的洗脱缓冲液进行分离，提取高纯度的完整外泌体。晚期核内体与外泌体