离心过程中注意是否发生蛋白沉淀,导致堵管。若发生沉淀,要确定沉淀的具体原因,是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤,降低浓度的办法解决,后者的方法是换不同的缓冲溶液,直到蛋白不发生沉淀为止。用以浓缩蛋白,如果要换Buffer,在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候,轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤),再浓缩至1ml左右,连续三次,之后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定,一般不多于500ul,也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算,三次达到1000倍以上,基本上可以达到换buffer的目的。超滤离心管可用于制备纯度高的蛋白质,以进行晶体结构解析或其他实验室操作。宁波浓缩超滤离心管制造厂
超滤离心管可以灭菌吗?1. 超滤离心管使用75%的乙醇消毒。2. 不能121℃灭菌,否则会变形,不论是是密理博、颇尔还是赛多利斯的都不能。3. 超滤管应当干燥保存,买回来的时候就是干的。当然也可以湿润保存,但是应当保存在20%的乙醇中,是为了防止没洗去的残留的液体长菌堵膜。4. 有人说湿润保存不能干,指的是卷式和板式超滤膜。离心管是一个简单的可以承受高转速压力的管子,比如离一些样品,分离出上清沉淀。超滤离心管会有一个类似于内管和外管的两个部分,内管中是带有一定分子量的膜,当高速离心时,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即内管中),就是超滤的原理.常用于浓缩样品。宁波浓缩超滤离心管制造厂超滤离心管可以根据不同孔径大小选择超滤膜,以便过滤出所需大小范围内的目标分子。
我们面对上面客户反映的问题使用2次以上出现问题是很正常的,但是我们也不能保证客户使用5次,8次,还是更多次就一定会出现穿孔不能用,我们必须再一次强调提醒做实验的各位老师,这个超滤管必须严格按照说明书规定,一次性使用,不要重复使用,重复使用虽然有的人可以用几次,但是过滤效果已经严重影响了,效果肯定一次次的下降!你说这样过滤的样品做后续实验,那你的后续实验还可信吗?所以厂家也一再强调较好不要重复使用!另外,有的客户说自己的超滤管使用一次就碎了,这是什么原因呢?超滤管的质量问题还是离心机转速的问题呢?说到这里,我们也再一次提醒大家超滤管使用如果转速太高,离心力肯定会更大!这样不断用力磨损,很容易一次就碎了,也可能使用几次碎了!
离心机的加速度调至较低档,减小对膜的压力。注意,一定要等离心机达到目的转速之后,方可离开离心机,否则离心机出问题时,无法一时间处理。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中,一般转速开的比说明书里的要低,这样可以延长离心管的使用寿命。当浓缩到剩下1ml时,取50ul缓冲溶液,加入10ul流穿,看有没变蓝色,以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了,将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管,用5mgml的BSA离心10min,再取流穿,跑蛋白胶或Bradford粗测,继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作,防止蛋白受热),直到所有浓缩液都加完为止。超滤离心管通常由聚碳酸酯或聚丙烯制成,具有强度高和化学惰性。
脱盐、更换缓冲液或渗滤是从含有生物分子的溶液中去除盐分或溶剂的重要方法。盐分去除或缓冲液更换可通过超滤管来完成,具体过程是浓缩样本,弃去滤出液,然后向浓缩液中加入任何所需的溶剂,恢复到样本原先的体积。"洗出"的过程可反复进行,直到杂质的浓度被充分降低。关于超滤管的常见问题与解答:Q:超滤管的膜材质是什么?A:超滤管的膜材质为默克密理博特有的Ultracel再生纤维素膜,生产工艺严格,截留分子量明确而准, 蛋白吸附损失小。Q:如果要用超滤的方法分离两种蛋白,那么这两个蛋白的大小需要相差多少?A:按照经验,建议两个蛋白的分子量要相差 一个数量级(10倍)。超滤离心管还可用于制备纯度高的酶、蛋白质等生物制品,以满足不同实验室和行业的需求。青岛3K超滤离心管咨询
使用超滤离心管时要注意控制转速,以避免过度旋转导致超滤膜损坏或溢出样品。宁波浓缩超滤离心管制造厂
超滤离心管通常不需要预处理即可使用,不过对于蛋白质样本处理,特别是较稀的蛋白质溶液来说(<10ug/mL),用超滤膜浓缩回收率常常是不定量的。虽然PES材料使非特异吸附较小化,但是,某些蛋白,特别是稀的时候,会有问题。非特异结合的程度随着个别蛋白结构的不同而不同。含有带电的或者疏水结构域的蛋白质更易于不可逆结合到不同表面。对超滤离心管表面做钝化预处理可降低蛋白质在膜表面的吸附性损失,大多数情况下,在浓缩稀蛋白溶液之前预处理柱子可以提高回收率,因为溶液可填满膜和表面暴露的空白蛋白吸附位点。钝化的方法是预先用较高容积的钝化溶液预浸泡柱子1小时以上,蒸馏水彻底冲洗柱子,再用蒸馏水离心一次以彻底除去可能残留在膜上的钝化溶液。注意钝化处理后别让膜干了。如果要留待以后使用,需要加无菌蒸馏水保持膜湿润。宁波浓缩超滤离心管制造厂