核外泌体

所有真核细胞类型包括造血细胞、上皮细胞、神经细胞、干细胞、脂肪细胞和病症细胞均可在培养条件下分泌外泌体。体内所有体液，包括血液、唾液、脑脊液、腹水，甚至尿液中都可以分离得到外泌体。这些外泌体传输多种信号分子，包括蛋白质、信使核糖核酸（mRNA）和非编码核糖核酸（RNA），其携带的分子可以被其他细胞吸收。因此，外泌体可以将生物信息转移到相邻细胞。这种细胞间通信不只涉及生理功能，还涉及一些疾病的发病机理，包括瘤、心血管疾病和神经退行性疾病等。随着外泌体的功能逐渐被发现，近年来，应用这些功能的医治法也在被开发出来。核外泌体

外泌体（Exosome）介导瘤血管的形成和转移。外泌体（Exosome）能将自身的细胞因子IL-8和VEGF释放到细胞外，作用于内皮细胞膜表面受体，导致瘤血管快速形成并较终通过发生EMT过程促进瘤的迁移。瘤细胞来源的外泌体（Exosome）中含有血管生长素、血管内皮生长因子等，这些细胞因子以不同的作用方式促进瘤血管的形成，如VEGF通过唤醒磷酸酯酶C和第二信使的形成，诱导纤维蛋白溶解酶原活化物的表达，使得基底膜降解，从而促进瘤细胞的迁移。外泌体marker近些年关于外泌体研究很普遍。

Vlassov等人发表的一篇外泌体的提取方法及组成的专利文献中介绍，通过终浓度为8%的PEG6000与生物体液共孵育14h后，10000xg离心1h，可将直径在30-150nm之间，且包含丰富RNA的外泌体沉淀下来。因此采用终浓度为8%的PEG6000沉淀血清中的外泌体，为了进一步纯化胎盘相关外泌体，将获得的包含外泌体的沉淀用PBS重新悬浮后，加入非线性蔗糖密度梯度层，10000xg超速离心5h，将分层液采用PEG6000进行2次沉淀。经过多次实验反复验证，确定同时表达外泌体标志蛋白分子及胎盘特异性蛋白分子的胎盘来源外泌体所在密度层。

要使外泌体在临床上得以更加广fan的应用，仍然需要更加深入的研究:(1)外泌体的提纯方式主要是超速离心，这种提纯方式效率较低，耗费时间长并且相对昂贵，并不适宜在临床上应用。(2)外泌体虽然具有一定的靶向性，但这种靶向性较弱，不足以解决中流的靶向zhiliao问题。通过在外泌体表面表达特异性肽的方法可以为上述问题的解决提供较为有效的途径。(3)在外泌体的载药fang式方面，现在常用的电穿孔法虽更具优势，但往往会对外泌体或药物的完整性产生影响，转染外泌体法不能保证基因类药物全部进入外泌体内而不是粘附在外泌体表面，存在着安全隐患。(4)外泌体作为细胞分泌物质，其本身可调性并不如脂质体以及聚合物基药物载体。科学家也尝试利用外泌体的压制发病机制功能。

外泌体是各种细胞外泌的直径在30-100nm之间的膜囊泡。因外泌体内含mRNA、microRNA等核酸和蛋白质对相邻细胞具有交换信息的功能。作为细胞间信号传导的通讯工具和作为病等各种疾病的生物标记话题比较热门。近些年关于外泌体研究很普遍，但是关于外泌体相关的实验技术，关于需要改进的课题存在很多。例如，外泌体提纯方法中，超速离心法和聚合物沉淀法（市售试剂盒）混入多种杂质，给后续实验产生了许多障碍。抗体亲和法和密度梯度离心法，虽然可以提取到高纯度的外泌体，但不能提取完整外泌体，无法分析外泌体具有的生理功能，也是两种提取方法的问题所在。而免疫印迹法（WB）和Elisa检测法作为被普遍应用的外泌体检测的一般方法，又存在检测时需使用大量外泌体和难以检测到低表达水平的标记蛋白。从体液和培养上清中高纯度提取的高纯度外泌体，在活内是否真的能发生作用尚未能确定。核外泌体

必须慎重分析得到的是否是外泌体。核外泌体

除了siRNA和miRNA，mRNA也可以作为“货物”被外泌体运输。研究表明，在移植了人肺中流的小鼠模型的血液和唾液中分离出来的外泌体含有中流细胞特异性的mRNA，而被爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)感ran的细胞分泌的外泌体中也含有EBV的潜伏期mRNA。因而，外泌体的这种运载mRNA的能力引起了中流研究者们的注意。近期，Saydam等率先报道了利用多泡体(含外泌体)负载mRNA/蛋白进行中流zhiliao的研究。研究者们利用脂质体2000或病毒载体对HEK-293细胞进行转染，使其分泌的多泡体含有mRNA/蛋白(CD-UPRTEGFP，其中CD:胞嘧啶脱氨酶;UPＲT:尿嘧啶磷酸核糖转移酶;EGFP:增强型绿色荧光蛋白)。将此多泡体注射至小鼠的神经鞘瘤处，并辅助注射5氟尿嘧啶(5-FC)，神经鞘瘤的增长被明显抑制。核外泌体