目前对我国首例输入性裂谷热病例病毒进行全基因组测定,分析其进化来源及潜在变异.方法提取样本核酸,非特异性反转录扩增病毒基因组RNA,使用IonTorrent二代测序仪进行病毒全基因组测定.对获得的基因组数据进行序列拼接、比对、进化树构建和关键位点分析.结果通过测定获得了病毒全基因组11979nt,该测定病毒属E基因分支,序列与先前南非分离株Kakamas相似度较高(>98%)。病毒Gn蛋白C端信号肽区存在1个氨基酸突变.结论本研究分析测定的裂谷热病毒全基因组与目前非洲流行株高度相似,病毒基因特征未出现明显变异。
想要通过高通量测序获得病毒全序列,需要经历:核酸纯化-文库构建-生物信息学分析这三大基本流程.国内病毒高通量测序分析原理
病毒的蛋白组成的特点是什么? (1)结构蛋白由病毒的基因组编码,结构蛋白组成病毒体的蛋白成分如病毒体的衣壳蛋白、基质蛋白和包膜蛋白。 (2)非结构蛋白由病毒的基因组编码,但非结构蛋白不参与病毒体构成的蛋白成分。非结构蛋白可存在于病毒体内,如病毒的酶就属于非结构蛋白,也可存在于侵染细胞。 病毒结构蛋白有以下几种功能:①病毒结构蛋白可保护病毒核酸,避免环境中的核酸酶和其他理化因素对病毒核酸造成破坏;②病毒结构蛋白可参与病毒的侵染过程,衣壳蛋白和包膜上的蛋白突起能吸附至易感细胞受体,引起侵染;③具有抗原***毒基因编码的衣壳蛋白和包膜蛋白具有良好的抗原性,能刺激机体产生免疫反应。DNA病毒高通量测序进化分析排行病毒全基因测序技术对疾病的致病原进行全基因组测序研究,能发现其中的变异与遗传情况。
深度测序技术对社会的影响:深度测序技术促进了基因检测的普及,对社会的影响第1个方面反映在商业模式的变化,即医学检验和健康管理方面的平民化、个性化趋势的形成。社会生活受到深度测序技术影响的第二个方面是基因测序的普遍应用。例如,基因关联将人与人通过遗传学关联起来,人们可以对基因进行分析判定亲缘关系,基因测定甚至可以帮助判定婚姻(包括遗传病等方面的)匹配度。公安机关可以通过基因比对,锁定犯罪嫌疑人、寻找丢散的儿童和亲人。甚至有报道表明,测定20多个基因就可以将人脸重构。基因检测的应用将随着基因-表型的关联得到更普遍的应用,对社会生活的方方面面起到重要作用。
一直以来,病毒基因组测序都是疾病诊断、流行病学调查和宿主-病原关系研究的重要手段。病毒的全基因组测序以及对应的生物信息学分析方法是研究病毒进化、毒力因子变异、疫病爆发之间的关系、疫病传播途径、不同遗传变异的分布模式、疫病发生地理区域的基础。与传统Sanger测序相比,NGS技术的发展使得一个小的研究小组可以拥有大量病毒株的全基因组序列,测序成本也在逐步降低。由于NGS产生的数据量非常庞大,其序列拼接难度也随之增加。而且对于低浓度高复杂度的样本,研究者除了PCR外别无他法。而PCR方法往往具有偏好性,丢失的片段将为序列组装带来非常高的失败率。对于完全未知的样本,无法通过PCR进行富集,要鉴定其种类需要调用各种方法,逐个尝试,工作量之大,其效率之低,使得一个新的研究方法的出现及其必要。
高通量测序技术正式启用之后,研究者可以将样品处理至标准浓度和体积后进行测序和分析。
第二代测序技术的发展:第二代测序技术(nextgene-rationsequencing,NGS)发展迅猛,与Sanger测序技术相比,NGS是一种能一次对几十万到几百万的DNA分子进行序列测定的高通量的测序技术,这种高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌地分析成为可能,因此又被称为深度测序(deepsequencing).相比传统的个体基因组测序,NGS使得测序价格日益廉价,并且在生物信息学软件的辅助下,可以将大量不同基因片段的信息连接起来进行基因组组装,完成生物的基因组测序,这种新的测序技术革新了植物病毒的诊断方法,对于病毒的流行病学和生态学研究起到了非常重要的推动作用。病毒全基因测序技术对疾病的致病原进行全基因组测序研究,能发现其中的变异与遗传情况。DNA病毒高通量测序进化分析排行
探普生物接触到的病毒全基因组测序项目有比较丰富的应用场景。国内病毒高通量测序分析原理
未培养病毒基因组的信息标准:①关于未培养病毒基因组标准的信息是在基因组标准框架内制定的,包括病毒起源、基因组质量、基因组注释、分类信息、生物地理分布和宿主预测;②UViGs有助于提高我们对病毒进化历史和病毒-宿主之间相互作用的理解;③病毒基因组组成和内容、复制策略和宿主的异常多样性意味着UViGs的完整性、质量、分类学和生态学需要通过病毒特异性指标来评估;④分析不同大小和不同样品类型的UViGs对于探索病毒基因组序列空白是有价值的。
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