外泌体荧光标记染料

外泌体有很多潜在优势，但是外泌体在药物递送中的应用研究才刚刚起步，尚有许多问题需解决：如何修饰外泌体的靶向性：缺氧瘤细胞来源的外泌体倾向于向缺氧瘤组织内募集；此外，还可通过在外泌体膜表面设计与靶细胞特异性结合的抗体、配体或受体来实现。如何提高药物装载效率：目前主要有①前装载方法（首先将药物加载到母细胞中，随后外泌体形成并包裹药物分泌到细胞外，常用的方法如转染、共孵育等）；②后装载方法（直接将药物加载到外泌体中，例如孵育、电穿孔、超声、挤出、冻融循环等）；③其他装载方法（主要是通过生物工程修饰母细胞来实现）。如何实现外泌体的大量生产：目前大规模生产外泌体的方法主要是自发生产和非自发生产。外泌体能负载的治理物质包括小分子化合物、蛋白质、寡核苷酸等，且在体液中宽泛分布且具有定向归巢能力。外泌体荧光标记染料

密度梯度离心是基于差速超高速离心的改良技术。该方法需预先利用常用的梯度液介质如蔗糖、碘克沙醇和氯化铯等，在离心管中构筑从底部到顶部密度逐渐降低的密度梯度带。根据密度梯度构建和沉降方式的不同,又可以分为速率区带离心法和等密度梯度离心法,前者主要根据颗粒的沉降速率分离,介质密度均小于外泌体密度,离心时样品在向超速离心管底部移动时,会通过密度不断增加的密度梯度区带,密度大的颗粒更容易穿过密度更高的梯度层,更快地到达管底,因此控制离心的时间很重要;等密度梯度离心法中的密度梯度区带,则会根据样品液中各种溶质成分来进行组合,离心过程中,无论离心时间多久,不同密度颗粒jin会富集到具有相同密度的梯度区带,而不会沉淀到底部。杭州鼻腔灌洗液外泌体目前，提取外泌体的方法主要有超速离心法、PEG沉淀法。

外泌体是新型治理剂，瘤转移是一个包括病细胞侵入、血管中存活和殖民化等多步骤的复杂过程。外泌体能够影响这个级联反应的每一步，因此可作为瘤治理的靶点。瘤细胞在转移到其他组织时需要在间质细胞间移动并到达血管中，在这个过程中，瘤细胞外泌体通过纤维连接蛋白促进瘤细胞的运动性，再通过蛋白酶促进细胞外基质的分解、血管生成，进而促进瘤转移。多数瘤细胞对转移的组织具有指向性，而外泌体表面的整合素就是决定其指向性的因子，如外泌体αvβ5整合素决定了对肝脏的指向性，而外泌体α6β4?α6β1整合素决定了对肺部的指向性。

虽然外泌体作为药物载体具有生物兼容性、稳定性和内在靶向性等潜在优势，但是外泌体在药物递送中的应用研究才刚刚起步，尚有许多问题需解决：选择何种细胞作为外泌体的供体：如DCs来源的外泌体可用于免疫治理，因其富含组织相容复合物（MHC）及T细胞共刺激分子，能在体内唤醒T淋巴细胞，进而抑制瘤细胞增殖；骨髓来源的间充质干细胞（MSCs）来源的外泌体对KRAS基因有抑制作用；γδT细胞、自然杀伤细胞（NK）、瘤细胞等均有研究报道可作为载药级别外泌体的细胞来源。外泌体又存在检测时需使用大量外泌体和难以检测到低表达水平的标记蛋白。

外泌体是由细胞细胞质内的晚期内泡小体以膜融合的方式通过胞吐方式主动分泌到细胞外环境的一种直径30-100nm的微型囊泡，其形态规则，呈圆形或椭圆形杯状结构，不同类型细胞分泌的外泌体具有很多共性，包括膜上富含脂筏及丰富的跨膜蛋白，如四次跨膜蛋白家族成员CD63、CD81等，表面为类似于细胞膜的脂质双分子层，具有一定的疏水性。外泌体能够携带微小RNA(microRNAs,miRNAs)、RNA、蛋白质等生物活性分子，并在细胞外环境稳定存在，而且通过传递供体细胞信息，调节靶细胞的代谢通路。外泌体可由多种类型细胞分泌，妊娠期母体血清中存在表达胎盘碱性磷酸酶（placentalalkalinephosphatase,）的胎盘来源外泌体，并且在妊娠中发挥重要的作用。外泌体无法分析外泌体具有的生理功能，也是两种提取方法的问题所在。外泌体荧光标记染料

从症状患者树突状细胞释放的外泌体中，含有各种症状细胞来源的蛋白质。外泌体荧光标记染料

在当代准确医疗的大趋势下，外泌体的发现和研究为肺病的早期诊断和医治提供了崭新的方向。外泌体在液体活检中的巨大潜力可以为肺病患者的早期发现和早期诊疗提供可靠依据。根据种瘤来源的外泌体在肺病的发发展和侵袭转移过程中的作用及相关机制的研究，临床医疗人员可以针对不同的患者制定合适的医治方案，以达到改善肺病患者生存率，延长肺病患者生存时间的目的。但是，针对外泌体的研究还存在诸多的问题有待广大研究者解决，如：外泌体的纯化及标记方法、如何寻找外泌体的靶基因、外泌体的作用机制及信号通路等。总而言之，外泌体的研究有着广阔的前景，基于外泌体与肺病的研究，有望研发出能够应用于肺病临床诊断和医治的有效措施，造福更多的患者。外泌体荧光标记染料