免疫组化临床应用对“未分化”cancer的分类。未分化cancer包括cancer或肉瘤,在HE切片上由于cancer的“未分化”而缺少cancer细胞的起源特征不能分类,初步区分组织学类型用非特异性抗体,在其基础上再选用特异性抗体做进一步鉴定。如分化差的cancer可显示Vimentin或S-100蛋白,有时淋巴瘤可以表达上皮膜抗原,一些黑色素瘤表现出角蛋白,这同时也强调了在cancer诊断中应使用一组抗体而不是单个抗体。如果您有实验外包的需求,可以与我们南京英瀚斯生物进行联系,我们也有做免疫组化的服务!有没有做免疫组化比较好的公司?甘肃小鼠免疫组化注意事项
免疫组化的发展路程?在临床病理诊断中,免疫组织化学(IHC)是一种很重要的技术和手段,从20世纪70年代开始,免疫组化技术就应用于病理诊断,对于诊断cancer、cancer分类、判断预后产生了巨大的影响,同时也扩展了人们对于各种疾病及cancer形成过程的认识,提高了病理诊断与研究水平。但是,随着免疫组化的广泛应用,发现免疫组化技术存在一些局限性。深入研究免疫组化原理和技术,必须熟悉各种抗体真阳性反应部位,实现实验室间免疫组化标准化,使免疫组化在病理诊断中发挥比较大的辅助作用。如果您有免疫组化相关的实验,可以与我们英瀚斯生物进行联系。安徽细胞免疫组化要多少钱免疫组化protocol,详情请看英瀚斯生物官网。
细胞属性的判定,免疫组化也可以进行这方面的临床应用。通过特定抗体标记出细胞内相应的抗原成分,来判定细胞的属性,确定cancer的来源。如细胞角蛋白(CK)是上皮性标记,CK阳性提示cancer为上皮源性cancer;降钙素抗体是甲状腺髓样cancer特有的标记;甲状腺球蛋白(Tg)阳性提示是甲状腺滤泡性cancer;前列腺特异性抗原(PSA)只见于前列腺上皮;胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性则提示胶质cancer;CD20和CD79a阳性则提示B细胞淋巴瘤;平滑肌肌动蛋白(Actin)阳性提示cancer为平滑肌源性;胃肠道间质瘤中原cancer基因蛋白产物CD117阳性;血管源性cancer中内皮细胞标记物CD34阳性等等。如果您需要做实验外包,可以与我们英瀚斯生物进行联系。
免疫组化如何比较大限度地降低组织非特异性染色?
(1)缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是重要的一条。
(2)一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。
(3)内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色;
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(4)非特异性组分与抗体结合,这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果;
(5)缩短DAB孵育时间或降低DAB浓度/过氧化氢浓度等;
(6)适当增加PBS冲洗次数和浸洗时间,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤为重要;
(7)防止标本染色过程中出现干片,这容易增强非特异性着色。 免疫组化可以看什么?
细胞爬片免疫组化检测实验步骤
1、选择贴壁良好的细胞爬片,用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。
2、PBS洗3次,每次5min。3、切片放入3%过氧化氢溶液,室温下孵育10min,以阻断内源性过氧化物酶。
4、PBS洗3次,每次5min,甩干后5%BSA封闭20min(封闭电荷)。
5、去除BSA液,每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织,4℃过夜。
6、PBS洗3次,每次5min。
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7、去除PBS液,每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗,4℃孵育50min。
8、PBS洗3次,每次5min。
9、去除PBS液,每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液,显微镜控制显色。
10、显色完全后,蒸馏水或自来水冲洗,苏木素复染,1%盐酸酒精分化(1s),自来水冲洗,氨水返蓝,流水冲洗。
11、切片经过梯度酒精(70-100%)10min一个梯度,脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封固。 英瀚斯生物,专业病理老师负责免疫组化外包!内蒙古细胞免疫组化价格
免疫组化技术的原理、分类和优点!甘肃小鼠免疫组化注意事项
免疫组化的特点:
1)特异性强。免疫学的基本原理决定抗原与抗体之间的结合具有高度特异性,因此,免疫组化从理论上讲也是组织细胞中抗原的特定显示,如角蛋白(keratin)显示上皮成分,LCA显示淋巴细胞成分。只有当组织细胞中存在交叉抗原时,才会出现交叉反应。
2)敏感性高。在应用免疫组化的起始阶段,由于技术上的限制,只有直接法、间接法等敏感性不高的技术,那时的抗体只能稀释几倍、几十倍;现在由于ABC法或SP三步法的出现,使抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合,这样高敏感性的抗体抗原反应,使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作。
3)定位准确、形态与功能相结合。该技术通过抗原抗体反应及呈色反应,可在组织和细胞中进行抗原的准确定位,因而可同时对不同抗原在同一组织或细胞中进行定位观察,这样就可以进行形态与功能相结合的研究,对病理学领域开展深入研究是十分有意义的。
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