药代动力学(PK)和药效学(PD)研究。免疫细胞zhiliao产品的药代动力学特点与传统的小分子或生物大分子药物有明显差异,可能无法进行吸收、分布、代谢和排泄(ADME)等传统药代动力学评估。由于检测技术的快速发展,申请人应利用科学合理的药代动力学评估方法,监测细胞活力、增殖/分化(例如细胞表型和功能性标记物)、持续存在(例如血药浓度-时间曲线下面积)、致瘤性、免疫原性、体内分布、异位灶、组织嗜性/迁移以及细胞/产品预期存活期内的功能(或其替代指标)等特性。如果一种方法不能完全反映细胞在体内的PK特性,建议申请人采用多种方法监测细胞在体内的增殖和存活情况。AAV整合位点,推荐唯可生物,实验实力强,专业性高,检测效率高,结果准确率高。南京CAR-T整合位点服务
插入突变风险评估一些整合性载体(如逆转录病毒、慢病毒、转座子)可将外源基因插入整合到细胞基因组中,这可能会导致关键基因突变或jihuo原基因,从而导致恶性liu风险增加。影响插入突变的关键风险因素包括:(1)载体的整合特征,如插入位点的偏好性;(2)载体的设计,如增强子、启动子等构建元件的活性,影响邻近基因的潜力;产生剪接突变体的潜在剪接位点或多聚腺苷酸信号等;(3)细胞载体拷贝数;4)转基因表达产物的功能活性(如与细胞生长调控相关)和表达水平;5)靶细胞群的转化可能性,这可能与细胞的分化状态、增殖潜力、体外培养条件和体内植入环境等有关。台州病毒整合位点报告基因编辑整合位点,推荐唯可生物,实验实力强,专业性高,检测效率高,结果准确率高。
通常不需要进行标准的遗传毒性组合试验,但应根据基因zhiliao产品的特点、产品的具体适应症、载体的已有信息、导入基因序列结构等,评估基因zhiliao产品整合进基因组的可能性,判断是否需要开展另外的遗传毒性研究,如研究基因组修饰的发生情况,并检测随后可能发生的异常细胞行为;评估插入突变(插入位点、插入拷贝数等)引起的遗传毒性风险。当基因zhiliao产品采用基因编辑或转座子技术时,需要关注脱靶编辑、转座子转座印迹引起的遗传毒性问题;鉴定/表征基因组整合位点。
病人在6个月后达到MRD阴性,CAR-T细胞在4.2年后仍然可以在外周血检测到,并且骨髓中检测不到B细胞liu克隆。二代测序整合位点分析显示这是因为某些CAR-T细胞的融合位置位于TET2基因9号到10号外显子之间可变剪切区域,导致TET2基因跳读和功能障碍,从而产生短寿命记忆细胞扩增和长寿命记忆细胞。使得药物可以持久作用于病人。研究者继而进行插入位点和CAR-T细胞扩增及持续作用时间的相关研究,利用慢病毒插入位点信息(INSPIIRED)和LASSO logistic 回归模型进行插入位置和药效学分析,初步建立预测模型。研究者还建议在CAR-T产品回输前进行类似的多变量预测可以对产品的安全性和有效性进行更为有效的评估。慢病毒整合位点如何进行分析,用什么产品进行分析呢?
在国家药典委员会公布的《人用基因制品总论》(草案)的3.1条款中,特别指出:“应检测重组载体基因组或质粒的完整性和均一性,载体和zhiliao序列的遗传稳定性”;“对于病毒载体,适当情况下应测定插入位点,并充分评估插入突变的可能性和相关风险”。对此,可分别采用宿主细胞全基因组重测序方法和LM-PCR结合二代测序方法为研究人员提供整合位点检测服务。通过测序分析可对整合位点相关基因进行功能分析,对整合位点偏好性画像,从而评估病毒载体的安全性。CAR-T慢病毒整合位点检测浅析。广州整合位点实验室
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当产品预期的活性成分可以明确时,申请人往往选择较能代预期活性的特定细胞亚群来描述产品剂量,例如,很多导入外源基因的免疫细胞zhiliao产品中的载体阳性细胞数。在这种情况下,申请人还应描述载体阳性细胞数与其它细胞成分的比例,并分析转导效率对患者安全性及有效性的影响。剂量递增,在恶性liu患者中开展早期探索性临床试验时,申请人经常选择3+3、改良毒性概率区间(mTPI)和贝叶斯比较好区间(BOIN)等设计。对于shou次开展人体临床研究的免疫细胞zhiliao产品,在选择剂量探索试验每个剂量组的样本量以及组间剂量增幅时,还应考虑非临床研究及类似产品的临床经验中剂量变化对受试者安全性和有效性的影响。南京CAR-T整合位点服务