PI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,它在嵌入双链DNA后释放红色荧光。常用于细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)的检测,常用于流式细胞仪分析。尽管PI不能通过活细胞膜,但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用,能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。2.染色过程(1)将1/10培养基体积的PI染色液加入到细胞培养基中(也可以用1/10浓度的PI缓冲液代替培养基)。(2)在37℃培养细胞10~20分钟。(3)用PBS或合适的缓冲液洗涤细胞两次。(4)用535nm激发波长,615nm发射波长的滤光器的荧光显微镜观察细胞。储存条件:-20℃干燥避光保存,有效期一年。注意事项:PI对人体有刺激性,请注意适当防护。与花青和罗丹明染料一样,荧光素也是一种有机染料。小动物荧光染料IR825
藻红蛋白-藻红蛋白(PE)是一种红色蛋白色素复合物,属于藻胆蛋白家族。它可以在红藻和隐植物中找到,它作为叶绿素色素的附属物。在生物科学中,荧光团可以与蛋白质结合,例如用于抗原检测的抗体等,因为它能够发出明亮的荧光。由于荧光团往往会很快发生光漂白,因此很少在荧光显微镜中使用。它经常用于流式细胞术。※别藻蓝蛋白(APC)-与藻红蛋白一样,别藻蓝蛋白也属于藻胆蛋白家族,是从红藻中分离出来的。在594和633nm的激光线激发下,荧光团的比较大吸光度在650nm处,而荧光发射峰在66nm处。与荧光素偶联物相比,荧光团的灵敏度已显示高5至10倍,并具有许多其他有益特性,包括大斯托克斯位移、高水溶性、长波长发射和耐猝灭。虽然别藻蓝蛋白通常不用于需要光稳定性的应用,但它***用于流式细胞术、ELISA、微阵列等过程以及各种依赖高灵敏度的应用。中国台湾荧光染料细胞膜D-荧光素(D-Luciferin)是萤火荧光素酶底物,其量子效率为0.88,是Luminol的20倍。
荧光染料:能发出荧光的染料。在吸收紫外线或可见光后,能把短波长的光转变为波长较长的可见光波而反射出来,呈闪亮的鲜艳色彩。例如,酸性曙红、荧光黄、红汞以及某些分散染料等。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。荧光染料可以单独使用,也可以组合成复合荧光染料使用。其中复合荧光染料是利用荧光共振能量转移技术合成的荧光染料,由距离非常近、能量可以在彼此间传递的一个供体及一个受体荧光物分子所组成。复合染料在受体分子的激发波长被激发,在供体分子的发射波长发射一个光子。荧光染料发展非常迅速,已开发的用于科研和临床应用的荧光染料已基本覆盖了由紫外到可见光及红外的整个光谱范围。
三:贴壁细胞染色1、将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。2、从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,但要使表面保持湿润。3、在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。4、37℃孵育细胞2~20min,不同的细胞比较好培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记效果。5、吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10min,然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。四:结果检测样品可在培养基中进行检测,可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。CY7 是一种 CY 染料。CY 为花菁 (Cyanine) 的缩写,是由奇数个甲基单元连接的两个氮原子组成的化合物。
所需的CY3-NHS酯的量取决于待标记蛋白的量,以及CY3-NHS的比较好摩尔比为10。示例:假设所需的标记蛋白为500μL2mg/mLIgG(MW=150,000),用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯,得到所需的CY3-NHS酯体积为5.05μL,详细计算过程如下:1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150,000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.运行偶联反应1)将室温新鲜制备的10mg/mLCY3-NHS酯缓慢加入到0.5mL蛋白质样品中于溶液中,轻轻摇动混匀,然后短暂离心,将样品收集于反应管底部。请勿混匀,否则2)将反应管安置避光处,在接下来的间隔轻轻蛋白水解60分钟。10-15分钟,轻轻翻转几次以充分混合5.偶联偶联物以下方案是使用SepHadexG-25柱封闭染料-偶联偶联物的范例。1)根据制造说明准备SepHadexG-25柱。2)将反应混合物(来自“Runconjugationreaction”)加载到SepHadexG-25柱的顶部。3)一旦样品在顶部树脂表面下方运行,立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需样品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。目前常用标记蛋白/抗体的荧光素主要有BODIPY类、香豆素类、罗丹明类、近红外类、NBD胺类以及菁染料等。海南细胞荧光染料
DiR的红外荧光可以穿透细胞和组织,在小动物成像中用来示踪。小动物荧光染料IR825
5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一种胺活性衍生物的荧光染料,具有广泛的应用,作为抗体和其他探针标记,用荧光显微镜,流式细胞仪、免疫荧光方法如ELISA和Western印迹实验。荧光素衍生物具有高吸收率、优异的荧光量子产率和良好的水溶性,是流式细胞仪和免疫荧光中生物检测**常用的荧光标记之一。**常用的荧光素包括用于标记蛋白质(特别是抗体)的异硫氰酸荧光素[5(6)-FITC)],5-FITC和用于标记肽和寡核苷酸的羧基荧光素(5-FAM和5(6)-FAM)。BIOFOUNT提供***的基于荧光素的染料、底物和偶联物,以及一系列具有针对细胞标记和检测优化的特性的质量iFluor™荧光标记染料。小动物荧光染料IR825
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