免疫组化中IHC vs ICC的区别。英瀚斯生物为您说明。除了生物学来源，IHC和ICC在样品处理的程度上也有所不同。ICC需要透化，要么通过固定过程，要么是单独的透化步骤，这样抗体才能与细胞内的靶点相结合。而IHC可能不要单独的透化步骤，这取决于切片的厚度和固定方法。包埋在石蜡中的IHC切片必须进一步处理，才能进行抗体染色。一旦处理好样品，IHC和ICC的染色操作就几乎没什么差异了。当然，就染色而言，根据所使用的抗体来优化还是少不了的。关于免疫组化，你想知道的都在这里！云南小鼠免疫组化推荐
细胞爬片免疫组化检测实验步骤
1、选择贴壁良好的细胞爬片，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。
2、PBS洗3次，每次5min。3、切片放入3%过氧化氢溶液，室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶。
4、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封闭20min（封闭电荷）。
5、去除BSA液，每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织，4℃过夜。
6、PBS洗3次，每次5min。
英瀚斯生物，细胞、动物、临床样本免疫组化检测都可完成！
7、去除PBS液，每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗，4℃孵育50min。
8、PBS洗3次，每次5min。
9、去除PBS液，每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液，显微镜控制显色。
10、显色完全后，蒸馏水或自来水冲洗，苏木素复染，1%盐酸酒精分化（1s），自来水冲洗，氨水返蓝，流水冲洗。
11、切片经过梯度酒精（70-100%）10min一个梯度，脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。 湖北做得好的免疫组化多少钱在南京英瀚斯做的免疫组化，效果不错！
英瀚斯生物为您整理免疫组化实验步骤
1、石蜡切片置于65℃烘箱中烘片2h，脱蜡至水，用PBS冲洗三次，每次5min。
2、切片置于EDTA缓冲液中微波修复，中火至沸后断电，间隔10min低火至沸。
3、自然冷却后PBS洗3次，每次5min。4、切片放入3%过氧化氢溶液，室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶。
5、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封闭20min（封闭电荷）。
6、去除BSA液，每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织，4℃过夜。
7、PBS洗3次，每次5min。
8、去除PBS液，每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗，4℃孵育50min。
9、PBS洗3次，每次5min。
10、去除PBS液，每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液，显微镜控制显色。
11、显色完全后，蒸馏水或自来水冲洗，苏木素复染，1%盐酸酒精分化（1s），自来水冲洗，氨水返蓝，流水冲洗。
12、切片经过梯度酒精（70-100%）10min一个梯度，脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。
免疫组化的抗原修复
很多抗原的可视性可以通过抗原修复来提高，抗原修复可以打破福尔马林固定时形成的蛋白质交联，从而使被掩藏的抗原显现出来。抗原修复技术包括不同时间长度的加热或者利用蛋白酶来做酶消化，例如蛋白酶K，胰蛋白酶或胃蛋白酶。加热的方法通常会用到微波炉，高压锅，蒸箱或水浴。将样品在接近100°C高温加热20分钟后再冷却同等的时间。**常用的抗原修复液有a)柠檬酸盐缓冲剂,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用柠檬酸盐缓冲剂做抗原修复：柠檬酸盐缓冲剂配方:10mM柠檬酸钠,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM柠檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0将含有柠檬酸钠或柠檬酸盐缓冲剂的染色盘放到蒸箱或者水浴中，预热到95-100°C。将切片浸没于染色盘中。盖子虚掩，孵育20-40分钟(研究者需自己决定比较好的孵育时间)。关掉蒸箱或水浴，将染色盘置于室温下，让切片冷却20分钟。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次，每次2分钟。开始封闭步骤。 动物、细胞的免疫组化、免疫荧光，就找英瀚斯生物！
免疫组化应该选择石蜡切片还是冰冻切片？
（1）要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是***我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。
（2）冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。
（3）石蜡切片的优点可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在-80度的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的的切片，为了防止RNA降解，保存一贯很重要。由于石蜡切片可以切到4微米左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。
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免疫组化的样本保存要求是什么？云南小鼠免疫组化推荐
免疫组化的局限性。灵敏度高、精确性和特异性是一种理想的cancer标记物必须具有的，但至今所发现的cancer标记物还没有能完全满足这些标准。某些正常细胞也分泌一些cancer标记物，因此cancer细胞学并不是单独产生一种标记物，即选用一组抗体比单一抗体更有利。在cancer诊断中评估免疫组化的局限性主要在抗体特异性和解释方面。在免疫组化操作中都必须有适当的阳性与阴性对照，作为技术完整性质量控制，如对照组被忽略或不理想时，免疫组化染色的结果要谨慎对待，免疫组化的正确结果不仅要依靠技术步骤上规范化操作，而且有赖于正确的解释，在报告免疫组化染色结果时不应孤立地解释，应考虑到诊断与鉴别诊断、所应用的抗体特性、所研究组织性质，同时还要注意假阳性与假阴性结果的干扰。云南小鼠免疫组化推荐
