做免疫组化时如何选择一抗？
1、单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。
2、应用范围的选择。有的一抗只能用于Westernblotting，或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至标明石蜡切片或冰冻切片。
3、种属反应性的选择（speciesreactivity）。这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差别，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。
4、种属来源，一般兔来源的多是多克隆抗体；而小鼠来源的多是单克隆抗体，但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。
5、生产厂家的选择。
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免疫组化在什么情况下进行组织抗原修复，抗原修复的条件是什么？
（1）由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。
（2）修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高pH的等）。
（3）微波修复，我们一般用6min*4次，效果不错。
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免疫组化指的是根据抗体与抗原特异结合的原理来检测组织切片中的抗原（如蛋白）。immuno的词根来自操作中所使用的抗体，而histo意味着组织。另一种类似的技术是免疫细胞化学（Immunocytochemistry，简称ICC）。这两个词大家经常混着用，看着好像差不多，但实际上还是有点区别。IHCvsICC对于IHC，组织是来自患者或动物，经过冷冻或石蜡包埋。将这些组织制成约4μm厚的切片，封片后再处理。通过这种方法，研究人员可观察细胞组分的定位，同时维持周围组织的原先结构。对于ICC，大部分细胞外基质及其他基质组分被去除，只剩下整个细胞来染色。ICC的来源可以是细胞悬液，来自患者或动物（如血涂片、拭子等），或在实验室中进行的组织培养细胞系。
免疫组化（IHC）利用抗体检测组织切片中蛋白质和其他抗原的定位。
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抗体-抗原的相互作用通过有色酶底物显色检测或荧光染料荧光检测进行观察。虽然IHC在定量方面不如蛋白质印迹或ELISA，但是IHC可以提供完整组织中蛋白定位的宝贵信息。蛋白表达谱对病理学家以及作为诊断工具都具有重要意义。
IHC实验成功的关键在于稳定、优化且可重复的染色方案，而该方案应使用高质量的特异性试剂。 南京有靠谱的能做免疫组化的公司吗？
免疫组化应该选择石蜡切片还是冰冻切片？
（1）要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是***我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。
（2）冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。
（3）石蜡切片的优点可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在-80度的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的的切片，为了防止RNA降解，保存一贯很重要。由于石蜡切片可以切到4微米左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。
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细胞爬片免疫组化检测实验步骤
1、选择贴壁良好的细胞爬片，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。
2、PBS洗3次，每次5min。3、切片放入3%过氧化氢溶液，室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶。
4、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封闭20min（封闭电荷）。
5、去除BSA液，每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织，4℃过夜。
6、PBS洗3次，每次5min。
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7、去除PBS液，每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗，4℃孵育50min。
8、PBS洗3次，每次5min。
9、去除PBS液，每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液，显微镜控制显色。
10、显色完全后，蒸馏水或自来水冲洗，苏木素复染，1%盐酸酒精分化（1s），自来水冲洗，氨水返蓝，流水冲洗。
11、切片经过梯度酒精（70-100%）10min一个梯度，脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。 河南动物组织免疫组化要多久
