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上海RIP免疫沉淀磁珠现货

免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）的实验方法通常包括以下步骤： 1. 样本准备 ...

免疫沉淀基本参数

品牌
世途科生物
产品名称
免疫沉淀磁珠Protein A/G
有效期
12个月

免疫沉淀企业商机

免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）的实验方法通常包括以下步骤：

1. 样本准备

2. 蛋白质浓度测定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法测定裂解液中蛋白质的浓度。

3. 抗体预处理：如果使用预固定的抗体，需先将抗体固定在固相支持物上，如琼脂糖珠或磁性微珠。

4. 免疫沉淀反应：将裂解液与特异性抗体（固定或未固定）混合，并在4°C下缓慢摇晃孵育过夜，以允许抗体与目标蛋白质充分结合。

5. 固相支持物的回收：对于未固定的抗体，加入与抗体特异性结合的蛋白A或蛋白G结合的固相支持物。

6. 洗涤：去除未结合的蛋白质和杂质，通常需要多次洗涤固相支持物。

7. 洗脱：使用适当的洗脱缓冲液（如加热的SDS加载缓冲液或酸性缓冲液）从固相支持物上洗脱免疫复合物。

8. 后续分析：对洗脱的蛋白质进行SDS-PAGE电泳、Western Blot、质谱分析等，以进一步分析目标蛋白质。

免疫沉淀技术的应用。上海RIP免疫沉淀磁珠现货

免疫沉淀技术的实验设计通常包括以下几个关键步骤：

1. 目标蛋白质的选择：

2. 抗体的选择：选择特异性强、亲和力高的抗体来捕获目标蛋白质

3. 样本的准备：收集和准备细胞或组织样本。

4. 蛋白质的裂解和释放：选择合适的裂解条件，如pH值、离子强度、去污剂等。

5. 蛋白质浓度的测定：确定裂解液中蛋白质的浓度，以便于后续步骤的标准化。

6. 免疫沉淀的操作：将特异性抗体与裂解液混合，并在适宜的条件下孵育，以形成抗体-抗原复合物。

7. 非特异性结合的减少：通过预纯化步骤去除可能的非特异性结合蛋白。

8. 洗涤：多次洗涤以去除未结合的蛋白质和杂质。

9. 目标蛋白质的洗脱：使用适当的缓冲液洗脱抗体-抗原复合物。

10. 后续分析：对洗脱的蛋白质进行进一步分析，如Western Blot.

11. 对照实验：设计适当的正对照和负对照，以评估实验的特异性和敏感性。

深圳蛋白免疫沉淀磁珠应用免疫沉淀技术的实验设计。

免疫沉淀实验中磁珠还是琼脂糖珠的选择取决于客户实验情况。

琼脂糖珠海绵状的结构 (直径 50-150 μm) 可以结合抗体 (继而结合靶蛋白) ，它能够直接高效、快速结合抗体，而不需借助特殊的专业设备。琼脂糖珠呈多孔结构，这使得它们拥有更大的表面积可与蛋白质相互接触，具有更高的结合载量。

与琼脂糖珠不同，磁珠是固体，抗体的结合限于磁珠的表面。磁珠 (直径 1-4 μm) 明显小于琼脂糖珠，尽管磁珠没有多孔中心增加结合能力，但每体积的磁珠数量比琼脂糖珠多，使磁珠拥有足够的抗体结合表面积满足高容量的抗体结合。

简而言之，琼脂糖珠的结合能力较强，而磁珠在得率，可重复性以及自动化方面有明显的优势。

Co-IP（Co-Immunoprecipitation，共免疫沉淀）的实验方法通常包括以下步骤：

1. 细胞培养与裂解：细胞在适宜的培养条件下生长到适当的密度。

蛋白质分离：裂解后的细胞混合物通过离心去除未破碎的细胞碎片和未裂解的细胞。收集上清液

2. 抗体的添加：将特异性抗体（针对目标蛋白质的抗体）加入到裂解物中。

3. 免疫复合物的形成：抗体与目标蛋白结合后，形成免疫复合物。

4. 亲和介质的使用：向混合物中添加蛋白A或蛋白G结合的珠子（如琼脂糖或磁性珠子）。

5. 免疫复合物的捕获：将混合物与珠子孵育一段时间后，使用磁铁或离心的方法将珠子收集起来，同时捕获了与之结合的免疫复合物。

6. 洗涤：洗涤珠子以去除未特异性结合的蛋白质和其他分子。

7. 洗脱：使用适当的缓冲液将免疫复合物从珠子上洗脱下来，常用的缓冲液包括SDS样品缓冲液，用于后续的电泳分析。

8. 蛋白质分析：洗脱的蛋白质可以通过SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot、质谱分析等方法进行进一步分析。

9. 实验对照：实验中应包括阳性对照和阴性对照，以确保实验结果的可靠性。

10. 数据分析：对实验结果进行分析，确认目标蛋白是否成功沉淀，并鉴定任何可能的相互作用蛋白。

免疫沉淀技术ChIP的原理是什么？

免疫沉淀（IP）实验中抗体的选择非常关键，因为抗体的特异性和亲和力直接影响到实验的成功与否。

1. 特异性：抗体应当对目标蛋白具有高度的特异性，以避免与其他蛋白发生非特异性结合，导致假阳性结果。

2. 亲和力：抗体对目标蛋白的亲和力要足够高，以确保在免疫沉淀过程中能够有效地捕获目标蛋白。

3. 抗体类型：单克隆抗体和多克隆抗体都可以用于IP实验。单克隆抗体提供更高的特异性和批间一致性，而多克隆抗体可能提供更强的结合能力和更广的表位覆盖。

4. 应用验证：选择已经过免疫沉淀（IP）或相关应用（如Western blot, IHC）验证的抗体，这增加了实验成功的可能性。

5. 供应商信息：选择信誉良好的抗体供应商，并查看供应商提供的技术数据和客户评价，以帮助做出决策。

免疫沉淀技术RIP是什么？IP免疫沉淀磁珠价格

免疫沉淀技术IP的实验设计。上海RIP免疫沉淀磁珠现货

ChIP（染色质免疫沉淀）实验是一种用于研究蛋白质与DNA相互作用的技术。以下是ChIP实验的实验方法概述：

1. 交联：将细胞与交联剂（如1%甲醛）孵育，通常在室温下进行10-15分钟。

2. 终止交联：添加甘氨酸以终止交联反应，孵育5分钟。

3. 收集细胞：通过离心收集细胞，并用PBS洗涤以去除交联剂。

4. 细胞裂解：使用裂解缓冲液裂解细胞，释放染色质。

5. 染色质剪切：使用超声波或酶消化将染色质剪切成适当大小的片段。

6. 免疫沉淀：将剪切后的染色质与特异性抗体孵育，然后添加蛋白A/G磁珠。

7. 洗涤：用低盐、高盐和LiCl洗涤液洗涤磁珠，去除非特异性结合物。

8. 洗脱：用洗脱缓冲液洗脱DNA。

9. 逆转交联：用蛋白酶K处理，然后在65°C下加热过夜以逆转交联。

10. DNA纯化：使用商业试剂盒或标准酚/氯仿方法纯化DNA。

11. 分析：使用qPCR分析富集的DNA，或进行测序以确定蛋白质结合位点。

上海RIP免疫沉淀磁珠现货

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