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IP免疫沉淀

Co-IP的优势： 1. 生理相关性：Co-IP可以在接近生理条件的条件下捕获蛋白质相互作用。 2. 特...

免疫沉淀基本参数

品牌
世途科生物
产品名称
免疫沉淀磁珠Protein A/G
有效期
12个月

免疫沉淀企业商机

Co-IP的优势：

1. 生理相关性：Co-IP可以在接近生理条件的条件下捕获蛋白质相互作用。

2. 特异性：使用特异性抗体可以提高实验的特异性。

3. 广泛应用：Co-IP技术适用于多种样本类型，包括细胞培养、组织样本等。

Co-IP的局限性：

1. 抗体依赖性：需要高质量的特异性抗体，否则可能得到假阳性或假阴性结果。

2. 非特异性结合：可能存在非特异性结合问题，需要仔细的实验设计和对照来控制。

3. 技术挑战：对于低丰度或弱相互作用的蛋白质，Co-IP可能面临技术挑战。

免疫沉淀技术Co-IP的实验设计。IP免疫沉淀

Co-IP的实验步骤：

1. 细胞裂解：首先，细胞或组织被裂解，释放其中的蛋白质。

2. 抗体结合：然后，将特异性抗体（针对已知蛋白质之一的抗体）加入到裂解物中。这些抗体会特异性地结合到目标蛋白（诱饵蛋白）上。

3. 免疫复合物形成：抗体与目标蛋白结合后，形成免疫复合物。

4. 沉淀：接着，使用蛋白A或蛋白G结合的珠子（如琼脂糖或磁性珠子）来捕获免疫复合物。蛋白A或蛋白G能够与抗体的Fc部分结合，从而拉下抗体以及与之结合的目标蛋白和任何相关的相互作用蛋白。

5. 洗涤：捕获的免疫复合物被洗涤以去除未特异性结合的蛋白质。

6. 洗脱和分析：免疫复合物被洗脱并进行进一步的分析，如Western blot（WB）或质谱分析，以鉴定相互作用的蛋白质。

温州蛋白免疫沉淀磁珠价格免疫沉淀技术的实验方法。

免疫共沉淀分析（Co-IP）实验原理与IP十分类似，基本的技术都是采用目标抗原特异性的固相化抗体；但IP的目标是纯化单一抗原，而Co-IP旨在分离抗原及与抗原结合的蛋白质或配体。

在Co-IP实验中，已知抗原称为诱饵蛋白，与之结合的蛋白则称为靶蛋白。靶蛋白可能是一些复杂的伴侣蛋白、信号分子、结构蛋白、辅助因子等，蛋白间相互作用强度范围可能介于高度瞬时和十分稳定之间。基本的Co-IP实验方案与IP相同，实际上任何IP系统均可用于Co-IP。但是，还有许多其他因素需要考虑，例如，结合和洗涤条件的优化，优化时，需要考虑到诱饵蛋白-靶蛋白的相互作用强度以及抗体-诱饵蛋白的亲和力。

免疫沉淀实验不同于WB实验的样品制备，对实验样品制备要求更高，除了要控制所有操作尽量在冰上完成外，关键的是裂解液的成分，裂解液成分直接决定了样品质量。

主要影响：

1. 蛋白的释放：许多目的蛋白定位在细胞器，质膜，细胞核，细胞骨架中，但通常这些亚细胞结构很难被裂解液有效溶解，所以很难将这些蛋白释放出来。

2. 蛋白相互作用：不同去垢剂对不同性质的蛋白质间相互作用影响程度不同，一些互作较弱的蛋白对尽管在比较温和的裂解液配方中仍然会被破坏。

免疫沉淀的原理是什么？

免疫沉淀技术RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的实验方法基于以下几个关键步骤：

1. 细胞裂解：首先，细胞或组织样本被裂解，以释放细胞内的蛋白质和RNA复合物。

2.抗体特异性结合：裂解后的样本中加入针对特定RNA结合蛋白的抗体。这些抗体能够特异性地识别并结合到目标蛋白。

3. 免疫复合物形成：抗体与目标蛋白结合后，形成抗体-蛋白质-RNA复合物。

4. 亲和介质捕获：使用蛋白A或蛋白G结合的珠子（如琼脂糖或磁性珠子）来捕获这些抗体-蛋白质-RNA复合物。蛋白A或蛋白G能够与抗体的Fc部分结合，从而拉下与之结合的复合物。

5. 洗涤：捕获的复合物被洗涤以去除未特异性结合的蛋白质和RNA。

6. RNA分离和分析：从珠子上洗脱或消化复合物，分离出RNA，并进行进一步的分析，如qPCR、Northern blot或高通量测序（RNA-Seq）。

免疫沉淀选琼脂糖珠还是磁珠？深圳ChIP免疫沉淀磁珠多少钱

免疫沉淀技术Co-IP实验步骤。IP免疫沉淀

免疫沉淀技术的实验方法通常包括以下步骤：

1. 样本准备

2. 细胞裂解：使用裂解缓冲液（含有蛋白酶抑制剂以防止蛋白质降解）裂解细胞，释放蛋白质。

3. 蛋白质浓度测定：使用BCA、Bradford或Lowry等方法测定裂解液中蛋白质的浓度。

4. 抗体预处理：如果使用预固定的抗体，需先将抗体固定在固相支持物上，如琼脂糖珠或磁性微珠。

5. 免疫沉淀反应：将裂解液与特异性抗体（固定或未固定）混合，并在4°C下缓慢摇晃孵育过夜，以允许抗体与目标蛋白质充分结合。

6. 固相支持物的回收：对于未固定的抗体，加入与抗体特异性结合的蛋白A或蛋白G结合的固相支持物。

7. 洗涤：去除未结合的蛋白质和杂质，通常需要多次洗涤固相支持物。

8. 洗脱：使用适当的洗脱缓冲液（如加热的SDS加载缓冲液或酸性缓冲液）从固相支持物上洗脱免疫复合物。

9. 后续分析：对洗脱的蛋白质进行SDS-PAGE电泳、Western Blot、质谱分析等，以进一步分析目标蛋白质。

10. 对照实验：包括正对照（已知能沉淀目标蛋白的抗体）和负对照（非特异性抗体或无抗体）以验证实验的特异性。

IP免疫沉淀

上海世途科生物(CYTOCH)是一家生命科学上游工具类企业。聚焦于细胞生物学相关的化学技术及相关产品的开发与生产，产品覆盖细胞培养产品如胎牛血清，支原体检测，支原体去除试剂等，细胞转染产品如转染试剂，及细胞检测产品如增殖凋亡检测，报告基因等多个科研场景，给终端客户提供良好的产品以及服务。

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