罗丹明123一种可对活细胞线粒体染色的细胞染色试剂。罗丹明123可透过细胞膜且在活细胞的线粒体内聚集,并发出黄绿色荧光。罗丹明123***用作检测线粒体膜电位,也常用于细胞凋亡检测。由于细胞内ATP的量与罗丹明123的荧光强度之间有相关性,此荧光染料被应用于检测细胞内的ATP。罗丹明123的比较大激发波长为507nm,比较大发射波长为525nm。在荧光显微镜下观察,呈现黄绿色荧光。
一:工作液配制用缓冲液或者预热的培养液直接稀释储存液到需要的工作液浓度(1~20µM),充分混匀。具体的工作液浓度使用者要根据自身实验体系进行调整。【注意】:对于细胞实验,要控制好总体稀释倍数,DMSO在培养液中的浓度不能超过0.1%,以避免DMSO对细胞的影响。
二:荧光显微镜观察1、用载玻片准备细胞。细胞数目应为5×104~5×105个/mL。2、在载玻片上孵育细胞,用PBS或HBSS洗涤细胞。3、将Rhodamine123工作液加入载玻片并在37℃下孵育30min至1小时。4、去除Rhodamine123溶液并用培养液洗涤细胞(洗涤细胞后如果要固定,加入10%福尔马林缓冲液并孵育15~20min,接着用PBS洗涤)。5、荧光显微镜观察细胞。 脂溶性荧光染料cy3、cy5、cy7等。天津光敏剂荧光染料
本质上,有机染料的特征在于源自在整个生色团上离域的光学跃迁或源自分子间电荷转移跃迁(从激发电子态的分子内电荷转移)的发射。在这里,表现出源自在整个生色团上离域的光学跃迁的发射的染料被称为共振染料(介观染料),而后者被称为CT染料(电荷转移染料)。花青、罗丹明和荧光素是一些最常见的共振染料,其特点是窄的吸收和发射带(略微结构化),往往相互镜像,以及小的、对溶剂极性不敏感的斯托克斯位移。另一方面,CT染料包括香豆素和丹磺酰荧光团等染料,其特点是与共振染料相比,吸收和发射带结构无结构,分离良好,以及更大的斯托克斯位移。同样,与共振染料相比,CT染料具有更小的摩尔吸收系数和荧光量子产率。对于共振和CT荧光染料,在结构-性质关系众所周知的情况下,可以通过精心设计的策略来微调光谱性质。湖南荧光染料APCCy7 DiC18(DiR)是一个亲脂性、近红外荧光花青染料,这个染料常用于标记细胞质膜。
一种发光杂环化合物,存在于生物发光的生物体中,如萤火虫。在含有三磷酸腺苷的情况下,通过荧光素酶氧化脱羧产生光。可用于荧光素酶生物发光成像和细胞高通量筛选应用。D-荧光素(D-Luciferin)是萤火荧光素酶底物,其量子效率为0.88,是Luminol的20倍。反应原理:首先,在镁离子存在下荧光素酶使荧光素与ATP反应,接着它被氧化形成二氧杂环丁烷结构并发出黄绿色的光。Luciferin-luciferase发光用于ATP监控以测定细胞活力以及细菌计数。它还用于报告基因检测。可与小动物***成像系统配套使用,用于标记LUC基因后的体内***荧光检测。D-荧光素游离酸(D-Luciferin,freeacid)、D-荧光素钾盐(D-Luciferin,potassiumsalt)和D-荧光素钠盐(D-Luciferin,sodiumsalt),钾盐、钠盐的形式是**通用的,因为它们都易溶于水。钾盐也是***动物检测使用的主要形式。它们的激发和发射波长分别为328nm和533nm。
染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一类亲脂性荧光染料家族,用于标记细胞膜和疏水性组织。这是一类环境敏感型荧光染料,当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子(例如蛋白质,虽然在水中其荧光强度很弱)结合时,其荧光强度***增强。它们具有很高的淬灭系数,偏光依赖性和很短的激发寿命。一旦应用于细胞中,这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散,导致在其比较好浓度条件下,将整个细胞染色。它们不同的荧光颜色:DiI(橙色荧光)、DiO(绿色荧光)、DiD(红色荧光)、DiR(深红色荧光),为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI可以分别与标准的FITC和TRITC滤光器一同使用。其中,DiO可以被633 nm He-Ne激光激发,并且具有比DiI更长的激发和发射光波长,为标记细胞和组织的那些本身就具有本底荧光的染料提供了非常***的替代品。DiR在***成像或者示踪中非常有用,因为它们所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织,并且在红外光范围内,其本底荧光水平很低。羰花青染料用作 Di 来标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。
二、***成像分析:D-荧光素,钾盐,D-PBS,不含钙、镁1、配制溶液使用无菌D-PBS(w/oCa2+;Mg2+)配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/ml),0.22µm滤膜过滤除菌(避光),分装后于-20℃或-80℃冷冻保存,避免反复冻融。使用时4℃融化,实验前平衡至室温(避光)2、注射量取决于注射方式,具体如下:注射方式剂量静脉注射(25-27gauge针头)按10µl/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液腹腔注射(25-27gauge针头)按10µl/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液肌肉注射(27gauge针头)50µl,浓度为1-2mg/ml荧光素工作液鼻内注射(pipette)50µl,浓度为3mg/ml荧光素工作液3、注射入体内10-20min(待光信号达到**强稳定平台期),再进行成像分析罗丹明具有出色的光稳定性以及许多光物理特性,使其非常适合用作激光染料、荧光探针和颜料。天津光敏剂荧光染料
吲哚菁绿在生物识别和药物输送方面也有广泛的应用。天津光敏剂荧光染料
D-荧光素是荧光素酶 (Luc) 的天然底物,可催化萤火虫产生典型的黄绿色光。该反应的 560 nm 化学发光在几秒钟内达到峰值,当底物荧光素过量时,光输出与荧光素酶浓度成正比。荧光素酶 (luc) 基因是用于研究和药物筛选的流行报告基因。化学发光技术几乎没有背景,使得 luc 报告基因成为检测低水平基因表达的理想选择。标准闪烁计数器可以可靠地测量低至 0.02 pg 的荧光素酶。除了作为基因表达报告者的作用外,荧光素酶还常用于极其灵敏的 ATP 检测中[1]。我们提供萤火虫荧光素酶 (HY-P1004)、荧光素游离酸 (HY-12591A) 及其水溶性钠盐 (HY-12591) 和钾盐 (HY-12591B)。天津光敏剂荧光染料