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PNGaseF去糖基化酶基本参数
  • 品牌
  • Genovis
  • 型号
  • L1-F02-025
PNGaseF去糖基化酶企业商机

为了证明Genovis的PNGase F冻干和PNGase F固定在各种底物上的去糖基化能力,用PNGase F冻干或PNGase F固定化处理了一系列糖蛋白。使用天然反应条件在一小时内有效去除曲妥珠单抗和依那西普上的所有N-糖,以及西妥昔单抗上的Fc-糖。当加入RapiGest™并在变性条件下进行反应时,西妥昔单抗的所有N-聚糖(包括Fab-聚糖)在PNGase F固定化10分钟内完全去除,PNGase F固定化15分钟内完全去除。在变性反应条件下,PNGase F 在 30 分钟内成功将更复杂的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用变性和还原反应条件,将常用的糖蛋白标准品RNase B在10或15分钟内完全去糖基化,分别使用PNGase F冻干或PNGase F固定化。在天然和变性条件下生成的去糖基化样品与LC-MS分析兼容。用于糖蛋白上β1-3,4-连接半乳糖的水解,而不会用酶污染z终制剂。上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究

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蛋白质的N-糖基化特征是一个关键的质量属性。它会影响生物制药的安全性和有效性,因此需要在开发和生产过程中进行表征和监测。常见的聚糖分析工作流程是用PNGase F释放N-聚糖,然后用荧光标记物(如2-AB、2-AA、普鲁卡因胺或RapiFluor-MS™(沃特世公司))标记生成的聚糖。然后使用HILIC-HPLC或毛细管电泳分离标记的聚糖,以表征和定量不同的聚糖结构。 在这里,使用游离聚糖方法分析zhiliao性抗体曲妥珠单抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白RNase B的N-聚糖。曲妥珠单抗和依那西普在天然条件下在37°C下用Genvois的PNGase F去糖基化1小时,而RNase B需要变性和还原才能完全去糖基化。因此,在50°C下用PNGase F去糖基化10分钟之前,用RapiGest™ SF表面活性剂(沃特世公司)和TCEP处理RNase B。 用RapiFluor-MS标记所得游离的聚糖,并通过HILIC UPLC-FLD-MS进行分析。云南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究依那西普和曲妥珠单抗游离聚糖。

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糖蛋白性能测试:O-聚糖的岩藻糖基化参与功能上重要的聚糖表位的合成,例如血型抗原和刘易斯结构。分析用这种复杂的聚糖结构修饰的糖蛋白可能具有挑战性,需要高效和特异性的酶工具。我们在许多糖基工程TNFR蛋白上测试了Genovis的FucosEXO,这些蛋白携带多达11个O-聚糖,这些O-聚糖以不同的键装饰。我们将该活性与其他市售岩藻苷酶进行了比较。FucosEXO 能够在 1 小时内对所有三种 TNFR 蛋白进行去岩藻糖磺酸处理,而用其他岩藻糖酶处理导致部分去除岩藻糖或根本没有去除。

GlycOCATCH用于纯化粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。它是基于无活性的Genovis的OpeRATOR®酶,该酶经过工程改造,可以高亲和力结合O-糖基化蛋白和肽。GlycOCATCH的应用包括O糖蛋白和肽的特异性富集或去除、糖组学、复杂样品的研究和生物制药的表征。1. 粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽的特异性富集;2. 可靠 - 高亲和力结合;3. 快速且易于使用的工作流程。不需要辅助因子或特殊缓冲液。GalNAcEXO中的酶来源于Akkermansia muciniphila,在大肠杆菌中表达,带有His标签,分子量为52 kDa。1. 用于方法开发的灵活格式;2. 可以结合酶以提高效率;3. 适用于自动化工作流程; 4. 即用型 - 只需加水即可!用于水解糖蛋白上GalNAc残基的冻干酶。Genovis的GalNAcEXO冻干剂以冻干粉末的形式提供,装在2000单位的小瓶中,用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc残基。与丝氨酸或苏氨酸连接的 GalNAc(称为 Tn 抗原)被 GalNAcEXO 快速有效地水解。

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G0F 抗体在 30 分钟内:半乳糖的存在会影响zhiliao性抗体引发的效应功能,为了研究抗体的作用方式,可能需要彻底去除半乳糖残留物。Genovis的GalactEXO Immobilized 的 β1-4 半乳糖苷酶活性在曲妥珠单抗上使用 30 分钟孵育证明。genovis的GalactEXO Immobilized 由强大的 GalactEXO 酶组成,该酶固定在琼脂糖珠上,并以易于使用的微离心柱形式格式化。GalactEXO是β-半乳糖苷酶的混合物,可有效去除N-和O-糖基化蛋白上的半乳糖残基。使用FabRICATOR®将抗体消化成亚基,并使用LC-MS进行分析。使用 GalactEXO 冻干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的转变,但后者在z终制剂中没有留下酶。没有任何半乳糖基化结构表明半乳糖残基完全水解,因此LC-MS数据中任何剩余的次要峰都可以注释为亚基的糖化。没有任何半乳糖基化结构表明半乳糖残基完全水解,因此LC-MS数据中任何剩余的次要峰都可以注释为亚基的糖化。融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和简单的粘蛋白型 O-聚糖。辽宁冻干粉形式PNGaseF去糖基化酶

SialEXO、FabRICATOR消化去糖基化蛋白,通过中级质谱测定完整质量数。上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究

在抗体药物及核酸药物领域,倍笃生物产品线涵盖药物研发的全流程,主要用——RNA转染试剂、生物活性物质纯化分离用填料产品、ADC的payload抗体(如anti-DXD、anti-Eribulin、anti-MMAE等)、动物造模用阳性及阴性抗体、泊洛沙姆P 188 Bio、工艺杂质及外源污染物残留检测产品、抗体结构域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等,品牌有瑞典Genovis、德国BASF、美国QED、中国君研生物、中国金传生物、中国毫厘科技、中国再帆生物等。这些国产品牌都具有国内自研、自产能力,批次生产稳定可靠、品质可控,为行业发展提供更多国产选择。上海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶糖生物学研究

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