Cy7DiC18(DiR)是一个亲脂性、近红外荧光花青染料。这个染料常用于标记细胞质膜。Cy7DiC18(DiR)的两个18-碳链插入到细胞膜,从而进行特定的、稳定的细胞染色,几乎不会发生细胞间的染料转移。Cy7DiC18(DiR)(近红外荧光)和其他细胞膜荧光染料如DiI(橙色荧光),DiO(绿色荧光),DiD(红色荧光)配合使用,为多色成像和流式细胞分析提供了有效的工具。Cy7DiC18(DiR)染色后可进行多聚甲醛(不可使用甲醇等其他试剂)的固定,但不建议在染色后进行透化的过程。此外,在固定透化(室温下用0.1%TritonX-100透化)后,也可以很好地进行质膜染色。
1、Cy7DiC18(DiR)染色固定的细胞或组织样品时,通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。
2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 DiD,DiO,DiI,DiR和DiS 染色的细胞可以分别用经典的FL1,FL2,FL3和FL4流式细胞仪检测。辽宁济南荧光染料
过标记——计算结果显示每摩尔145,000MW的蛋白标记的荧光团大于10mol。虽然过标记的蛋白也可以使用,但可能会引起蛋白的聚集、降低抗体结合抗原的特异性,这些都会造成非特异性结合。过标记还会引起荧光淬灭。可以增加蛋白或减少反应时间。3.未结合染料难以去除——尽管大部分时候用分离柱可以较好的纯化蛋白偶联物,但仍可能会有痕量的游离染料留在偶联物溶液中,会使标记计算的值偏高。可用分离柱再次分离或透析去除。4.蛋白或蛋白偶联物无法洗脱——不要再加缓冲液,只需再次离心一次或几次。杭州荧光染料DIO吲哚菁绿在生物识别和药物输送方面也有广泛的应用。
Cy3 (Cyanine 3) 是一种发橘黄色荧光的花青素荧光染料。Cy3染料的激发峰和发射峰分别在550 nm和570 nm左右,它的荧光肉眼观察很明亮,并且对pH不敏感,在共聚焦显微镜中可以用532nm(肩峰)或者556nm(顶峰)的激光束激发,在普通荧光显微镜中可以用 TRITC (tetramethylrhodamine) 的滤片观察,所以在绝大部分荧光仪器上都可以使用。Cy3也是Dil等细胞电位追踪剂的母核,所以它是在生物技术中非常有用的荧光染料。在荧光成像时,Cy3的背景荧光一般认为比TAMRA等TRITC系列的染料低。 Cy3可以用来标记蛋白,抗体,多肽等,它常见的使用是标记核酸分子(DNA和RNA)。基于荧光图谱的相似性,Cy3可以被TAMRA,TRITC, BODIPY TMR等染料替代,在需要更明亮,更稳定的替代物时,可以考虑使用AF547或者AF555等。
藻红蛋白-藻红蛋白(PE)是一种红色蛋白色素复合物,属于藻胆蛋白家族。它可以在红藻和隐植物中找到,它作为叶绿素色素的附属物。在生物科学中,荧光团可以与蛋白质结合,例如用于抗原检测的抗体等,因为它能够发出明亮的荧光。由于荧光团往往会很快发生光漂白,因此很少在荧光显微镜中使用。它经常用于流式细胞术。※别藻蓝蛋白(APC)-与藻红蛋白一样,别藻蓝蛋白也属于藻胆蛋白家族,是从红藻中分离出来的。在594和633nm的激光线激发下,荧光团的比较大吸光度在650nm处,而荧光发射峰在66nm处。与荧光素偶联物相比,荧光团的灵敏度已显示高5至10倍,并具有许多其他有益特性,包括大斯托克斯位移、高水溶性、长波长发射和耐猝灭。虽然别藻蓝蛋白通常不用于需要光稳定性的应用,但它***用于流式细胞术、ELISA、微阵列等过程以及各种依赖高灵敏度的应用。D-荧光素钾盐荧光染料。
选择荧光染料时要考虑那些因素:激发波长处的消光系数应尽可能高:消光系数是衡量可以吸收多少光子的量度。量子产率应该尽可能高:这是吸收光子与发射光子的比率。消光系数和量子产率的乘积就是亮度。荧光染料应该是光稳定的:遗憾的是,比较不同公司染料的光稳定性的研究并不多。光致变色行为:对于STORM实验,您需要一个闪烁的荧光团。但是,对于分子跟踪实验,您***不想要闪烁的荧光团。活/死细胞渗透性。您想要的反应侧基(例如HaloTag、抗体等)。当您使用多个荧光探针时,尤其是当您量化共定位时,请谨慎处理其他颜色通道中的渗色。单独测试所有荧光探针以评估渗透。CY5荧光染料是一种被广泛应用于生物分子检测和荧光成像等领域的高效、稳定的荧光标记试剂。免疫荧光荧光染料荧光素钾盐
目前常用标记蛋白/抗体的荧光素主要有BODIPY类、香豆素类、罗丹明类、近红外类、NBD胺类以及菁染料等。辽宁济南荧光染料
所需的CY3-NHS酯的量取决于待标记蛋白的量,以及CY3-NHS的比较好摩尔比为10。示例:假设所需的标记蛋白为500μL2mg/mLIgG(MW=150,000),用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯,得到所需的CY3-NHS酯体积为5.05μL,详细计算过程如下:1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150,000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.运行偶联反应1)将室温新鲜制备的10mg/mLCY3-NHS酯缓慢加入到0.5mL蛋白质样品中于溶液中,轻轻摇动混匀,然后短暂离心,将样品收集于反应管底部。请勿混匀,否则2)将反应管安置避光处,在接下来的间隔轻轻蛋白水解60分钟。10-15分钟,轻轻翻转几次以充分混合5.偶联偶联物以下方案是使用SepHadexG-25柱封闭染料-偶联偶联物的范例。1)根据制造说明准备SepHadexG-25柱。2)将反应混合物(来自“Runconjugationreaction”)加载到SepHadexG-25柱的顶部。3)一旦样品在顶部树脂表面下方运行,立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需样品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。辽宁济南荧光染料