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深圳支原体去除试剂货期

检测新鲜培养基是否有支原体污染，可以采用以下五种方案： 1. 培养法：这是一种传统且可靠的方法，通过将培养基接...

支原体基本参数

品牌
世途科生物
型号
CM0001

支原体企业商机

检测新鲜培养基是否有支原体污染，可以采用以下五种方案：

1. 培养法：这是一种传统且可靠的方法，通过将培养基接种到适宜支原体生长的微生物培养基或琼脂平板上，观察是否有支原体生长。这种方法较为耗时，但成本较低。

2. 荧光染色法：使用特定的荧光染料（如Hoechst 33258）对细胞进行染色，然后在荧光显微镜下观察。如果存在支原体污染，可以看到细胞表面或细胞间隙中支原体DNA的荧光染色。

3. PCR法：通过设计针对支原体特定序列的引物，利用PCR技术特异性扩增目标DNA。PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳进行检测，如果出现条带则表明存在支原体污染。

4. 电镜观察法：使用电子显微镜直接观察培养细胞中的支原体污染情况。这种方法可以提供直观的支原体形态信息，但设备要求较高。

5. 一步法恒温支原体检测：使用特定的试剂盒，如Yeasen一步法恒温支原体检测试剂，采用等温扩增技术，通过颜色变化（由蓝紫色变为天蓝色）进行快速检测。

细胞培养过程中支原体污染怎么预防？深圳支原体去除试剂货期

对于同一个样品，如果PCR检测结果为阳性而一步法恒温检测试剂盒结果为阴性，可能的原因包括：

1. 灵敏度差异：PCR方法通常具有较高的灵敏度，可以检测到单个拷贝的支原体DNA。相比之下，一步法恒温检测试剂盒可能需要更高的支原体拷贝数才能检测出阳性结果，例如需要10^3个拷贝。如果样品中的支原体数量低于一步法试剂盒的检测阈值，就可能出现PCR阳性而一步法阴性的情况。

2. 检测范围：PCR检测可以针对特定的支原体序列设计引物，如果样品中的支原体种类或序列与一步法试剂盒的检测范围不完全匹配，可能导致一步法检测不出。

3. 样品处理和提取：一步法恒温检测试剂盒可能对样品的处理和DNA提取有特定的要求。如果样品处理不当或DNA提取效率不高，可能会影响一步法试剂盒的检测结果。

4. 试剂盒特异性：一步法恒温检测试剂盒可能设计用于检测特定的支原体种类，如果样品中的支原体与试剂盒的特异性不匹配，可能导致假阴性结果。

5. 抑制物的影响：PCR检测可能对样品中的某些抑制物不那么敏感，而一步法恒温检测试剂盒可能更容易受到这些抑制物的影响，从而降低检测的灵敏度。

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支原体去除试剂使用后，对支原体的检测可能会有影响。一些支原体去除试剂通过特异性地与支原体膜结合、改变支原体膜的通透性来杀死支原体，而对真核细胞几乎没有影响。然而，某些情况下，去除试剂可能会对细胞的活力和形态产生一定的影响，尤其是在去除剂作用期间。此外，如果去除剂的效果不彻底，可能会导致细胞再次被支原体污染。

需要注意的是，某些支原体去除试剂可能会在去除支原体的过程中导致支原体膜溶解，从而释放出支原体的DNA，这可能会在随后的支原体核酸检测中引起假阳性结果。因此，在去除支原体后，建议在继续正常传代培养几代细胞后再进行支原体检测，以确保检测结果的准确性。

方法	灵敏度	优势	劣势
培养法	☆☆☆	ü 便捷 ü 便宜 ü 金标准	ü 费劳力 ü 耗时长 ü 需要特定的培养基 ü 特定支原体种类需要特定的培养基
DNA染色 (DAPI or Hoescht)	☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 可能难以判读结果 ü 无法鉴别支原体种属 ü 可能假阳性可能性
间接染色	☆☆☆	ü 迅速 ü 便宜 ü 易检测	ü 费时 ü 需要细胞系指示
ELISA	☆☆	ü 迅速 ü 客观，易判读结果 ü 可以鉴别支原体种属	ü 受抗体限制 ü 价格高
免疫染色	☆☆	ü 迅速 ü 可检测支原体种属 ü 价格略高	ü 可检测的支原体种属有限
放射自显影	☆☆	ü 迅速	ü 难以判读结果 ü 无法鉴别支原体种属 ü 费劳力
生物发光	☆☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 难以判读结果 ü 无法鉴别支原体种属
PCR	☆☆☆	ü 便宜 ü 迅速 ü 具有特异性	ü 可能假阳性可能性 ü 检测特异性依赖引物特异性 ü 需要提取DNA
Real-Time PCR	☆☆☆	ü 便捷 ü 迅速 ü 具有特异性 ü 结果可靠 ü 高通量	ü 可能假阳性可能性 ü 检测特异性依赖引物特异性 ü 需要提取DNA
LAMP	☆☆	ü 便捷 ü 无需DNA提取 ü *需10min左右的实验操作时间 ü 具有特异性 ü 高通量	ü 可能假阳性可能性 ü 检测特异性依赖引物特异性支原体预防主要是什么成分？

支原体污染和黑胶虫污染是两种不同类型的细胞培养污染，它们具有各自的特点和区别：

支原体污染：在相差显微镜下，支原体呈暗色微小颗粒位于细胞表面和细胞之间。

黑胶虫污染：在高倍镜下，被黑胶虫污染的细胞膜会变得模糊不清，边界不清晰，有粗糙感。

污染的影响：

支原体污染：可能导致细胞增殖缓慢，甚至从培养器皿脱落，影响细胞的DNA、RNA及蛋白表达。

黑胶虫污染：与细胞竞争性生长，开始时对细胞没有什么影响，但当数量多时，细胞生长会受到影响直至死亡。

污染的来源：

支原体污染：可能来源于工作环境的污染、操作者本身、培养基的污染、交叉污染、实验器材带来的污染以及用来制备细胞的原始组织或部位的污染。

黑胶虫污染：可能来源于细胞本身的污染或从动物取材时的污染，也可能通过培养箱空气进行污染。

一步法支原体检测试剂盒怎么防污染？杭州细胞支原体预防试剂多少钱

细胞培养中支原体为什么难以彻底消灭？深圳支原体去除试剂货期

qPCR法，即定量聚合酶链式反应（Quantitative Polymerase Chain Reaction）法，是一种高度灵敏和特异的分子生物学技术，用于检测和定量DNA序列。在支原体检测中，qPCR法的原理主要包括以下几个步骤：

1. DNA提取：首先从待测样本中提取DNA，这可能包括细胞培养上清液或组织样本中的支原体DNA。

2. 设计特异性引物：针对支原体的保守DNA序列，如16S rRNA基因，设计特异性的DNA引物。

3. 荧光标记探针：使用荧光标记的探针，该探针与目标DNA序列互补，能够在PCR扩增过程中与扩增的DNA结合。

4. Ct值确定：Ct值（阈值循环数）是指在PCR反应中，荧光信号强度超过预定阈值的循环次数。Ct值越低，表示样本中支原体DNA的量越多。

5. 定量分析：通过标准曲线法或相对定量法，将Ct值转换为支原体DNA的定量结果。

qPCR法的优势在于其高灵敏度和特异性，能够检测到非常低水平的支原体污染，并且可以在短时间内提供结果，这对于需要快速检测的生物制品生产和细胞培养质量控制非常重要

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