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所有反应孔背景信号好、Ct值都在19~25之间,荧光扩增曲线呈典型的S型,说明本发明实例1提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法具有较好的可行性。将四份不同来源不同的人血液样本进行荧光PCR扩增检测,每份样本平行三次,结果分别如图2、图3、图4、图5所示,由图可见,每个样本的平行实验,其曲线的Ct值很接近且≤25。说明本发明实例提供的血液样本快速提取法用于荧光PCR扩增的方法有可靠的重复性以及较好的均一性。实施例2与市场现有的血液基因组提取试剂盒产品对比。本发明的具体步骤如下:将**管颠倒混匀后,吸取100μL血液至,加入200μL的核酸释放剂(20mM~80mM的氢氧化钠溶液、~、~、~、~***钠、~3%甲酰胺),涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀;然后再加入200μL核酸释放剂,涡旋1min至沉淀完全散开,5000g离心30s,弃上清;向细胞沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的血液基因组DNA;取上清液3μL,加入到配制好的荧光PCR反应液,于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。选用某公司的血液基因组提取试剂盒作为方法比对,具体操作过程:将取血管颠倒混匀数次,吸取200μL血液于。湖南海绵口腔拭子源头直供口腔细胞采样时要撕开口腔拭子外包装,小心取出口腔拭子(注意:整个取样过程中手不能接触拭子部分)。
本发明的特征在于:应用本发明的血液基因组DNA提取方法在10分钟内提取血液基因组可用于荧光PCR扩增检测,主要步骤如下。(1)将**管颠倒混匀后,吸取100μL血液或者吸取100μL口腔拭子样本保存液至,加入200μL的核酸释放剂,涡旋混匀,然后5000g离心30s,弃上清,获得细胞沉淀。(2)将步骤(1)中得到的血液细胞沉淀中再加入200μL核酸释放剂,涡旋振荡1min,至沉淀完全散开,然后5000g离心30s,弃上清。(口腔拭子样本则无需进行此步骤)。(3)向步骤(2)所获得的沉淀中加入50μL核酸释放剂,涡旋振荡1~2min;室温放置5min,12000g离心30s,取上清液即为提取的基因组DNA;所述的核酸释放剂组成为20mM~80mM的氢氧化钠溶液、~、~、~、~***钠、~3%甲酰胺;所述荧光PCR反应液组成为ROX、TaqMan探针、引物、dNTP、dUTP、UDG、BSA、聚合酶及缓冲液。附图说明图1为实例1检测的8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。图2~图5为实施例1提供的四份血液样本的三次平行实验的荧光扩增曲线图。图6为实施例2对比实例1提供的对8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。具体实施方式为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案。
口腔拭子DNA样本保存套装FirePureTMBalSwabDNAStorageKit货号:FG0212规格:50套产品简介:口腔拭子(口腔脱落细胞)取样是简单、无痛、无创的DNA标本采集方法。本产品包含采样拭子及保存液,适用于采集任何年龄段人群的DNA样本。产品特点:1.采集的标本数量由传统采样拭子的20%提高到了60%.2.对收集到的标本有超过90%的释放率,从而确保了结果的高度可靠性.3.塑料杆上有独特的可折断设计,方便标本运输.4.环氧乙烷灭菌消毒,独立包装.使用方法:(1)撕开外包装,小心取出口腔拭子(注意:手不能接触拭子部分)。(2)握住手柄,使拭子头部充分接触左侧脸颊内部,旋转拭子,让拭子头部充分接触口腔粘膜,重复此动作1分钟。(3)用同样的方法在右侧脸颊部/右侧上下牙床处粘膜处进行第二根拭子的取样。(4)将沾有口腔脱落细胞的拭子放到装有保存液的采集管中,装回采集管。相关产品:口腔拭子,DNA样本保存。 如果您选择匿名检测,请在姓名处填写送检登记表上的条形码编号。
用口腔拭子做亲子鉴定与抽血结果哪个好?对于亲子鉴定,委托人往往是慎重而严肃的,因为亲子鉴定结果的出炉,能够说明很多问题,并且还会带来一系列化学反应,比如丈夫可以通过亲子鉴定了解孩子是否自己亲生,从而确认自己是戴了“绿帽子”还是庸人自扰,而作为妻子,则可以通过亲子鉴定证明自己的清白,维护个人尊严和名声。用口腔拭子做亲子鉴定与抽血结果哪个好?华曦司法鉴定所的**告诉我们,DNA鉴定需要提供的检材类型是多样化的,常规检材有:口腔黏膜、血液、血斑、带有***的毛发。特殊检材包括**、精斑、牙刷、胎儿绒毛、胎儿羊水、流产物、组织、脐带血等。口腔拭子就是用单头的医用棉签也称为棉棒,通过擦拭口腔来采集口腔粘膜上皮细胞。与抽血采样相比,口腔拭子的特点是简便而且无创、无痛。用口腔拭子做亲子鉴定和抽血用血液做DNA鉴定是同样准确的,没有什么区别,两者的DNA鉴定结果是完全一致的,因为一个人的DNA无论来自于口腔细胞还是血液中的白细胞都是一样的,不会因为用的检材的不同而出现不同的鉴定结果。 这款口腔拭子采用国际通用的方便消灭细菌的纸塑包装。吉林医疗口腔拭子批发
口腔拭子应该持续15s而不产生长久变形或者折断的现象。湖南海绵口腔拭子源头直供
同样唾液和口腔拭子中核酸提取方法与血液的提取方法相似包括以下4个过程:1.通过裂解液裂解口腔脱落细胞,释放核酸物质。2.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质,去除其他杂质。3.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。4.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。传统的提取方法由于核酸提取纯化过程耗时长,成本较高,步骤繁多,增加了基因污染的风险。因此需要一种血液、唾液和口腔拭子样本经过简单处理就可以作为模板进行荧光PCR扩增检测方法,满足科研和医学领域快速检测的要求。技术实现要素:本发明提供了一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。该发明通过快速简单处理口腔拭子和血液样本,且无需纯化可直接用于荧光PCR扩增的DNA。10分钟内即可得到应用于ARMS-PCR反应体系的模板DNA。同时优化ARMS-PCR荧光体系,在反应液中加入防污染UDG酶以及提高Taq酶稳定性的的BSA,从而实现血液和口腔拭子基因组快速荧光PCR扩增检测。该方法快速简单,成本低廉,检测灵敏,且用该方法提取的基因组与商品化试剂盒提取的基因组的检测结果相近。湖南海绵口腔拭子源头直供
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