细胞培养中支原体检测出现假阳性结果可能由以下原因引起:
1. 扩增产物污染:PCR扩增产生的大量DNA拷贝若未妥善处理,极微量的污染就可能导致假阳性结果。
2. 引物设计不当:引物设计不够特异性,可能会与非目标序列发生反应,导致非特异性扩增。
3. 试剂质量问题:使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等试剂质量不佳,可能引起非特异性扩增或假阳性结果。
4. 操作技术问题:实验操作不规范,如混合样本、标签错误或样本标识不清等,可能导致假阳性结果。
5. PCR反应条件设置不当:不恰当的PCR反应条件,如温度和时间选择不当,可能导致非特异性扩增。
6. DNA污染:PCR环境中的DNA污染会干扰结果,导致假阳性
支原体去除的原理是什么?深圳细胞培养支原体预防价格
目前有 210 +种不同种类的支原体分布于人类、动物、昆虫和植物中,其中 20 +种在细胞培养中被发现为污染物。支原体在实验室中的传播来源多种多样,主要来源包括实验室人员、胎牛血清(FBS)或新生牛血清(NBS)、以及由猪来源的胰蛋白酶溶液。此外,来自其他实验室或商业供应商的细胞培养物、培养基、污染的试剂;非无菌供应品、培养基和溶液;实验室人员;培养箱;液氮;空气颗粒和气溶胶;抗*素的过度使用;细胞培养器皿的不正确密封;以及其他的支原体细胞培养物等都可能成为支原体的传播途径。
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支原体污染一旦发生,不仅对细胞培养造成严重影响,甚至可能导致实验结果失真。而且支原体污染在细胞培养实验中相当常见。因此,预防措施是确保细胞培养环境和实验结果可靠性的重要手段。
01/ 良好的无菌技术及实验操作,保证操作不会引入新的污染
02/ 保持实验空间的清洁
03/ 确保从可靠的来源获取细胞,减少不同细胞之间的交叉传染
04/ 防止交叉污染
05/ 减少气溶胶生成
06/ 谨慎使用抗*素
07/ 定期支原体筛查
08/ 丢弃或处理受到支原体污染的细胞
09/ 保持良好的记录
qPCR法,即定量聚合酶链式反应(QuantitativePolymeraseChainReaction)法,在支原体检测中的应用主要体现在以下几个方面:
1. 快速定性检测:qPCR法可以快速检测生产原料、细胞库、病毒种子、病毒或细胞收获液、治*用细胞中潜在的支原体污染。
2. 临床样本检测:qPCR法可用于检测实验室样本及临床样本中的支原体,具有快速、特异性强、灵敏度高、稳定性好等优点。
3. 监管要求:基于TaqMan的qPCR测定专门针对检测细胞治*和复杂生物生产样本中的支原体而开发,其性能满足或超出监管要求,如10CFU/mL。
4. 药物质量控制:qPCR法提供早期检测支原体污染的方法,适用于药物质量控制,具有快速、高度特异性、灵敏性,并符合国际准则。
支原体污染和黑胶虫污染有什么区别?
对于同一个样品,如果PCR检测结果为阳性而一步法恒温检测试剂盒结果为阴性,可能的原因包括:
1. 灵敏度差异:PCR方法通常具有较高的灵敏度,可以检测到单个拷贝的支原体DNA。相比之下,一步法恒温检测试剂盒可能需要更高的支原体拷贝数才能检测出阳性结果,例如需要10^3个拷贝。如果样品中的支原体数量低于一步法试剂盒的检测阈值,就可能出现PCR阳性而一步法阴性的情况。
2. 检测范围:PCR检测可以针对特定的支原体序列设计引物,如果样品中的支原体种类或序列与一步法试剂盒的检测范围不完全匹配,可能导致一步法检测不出。
3. 样品处理和提取:一步法恒温检测试剂盒可能对样品的处理和DNA提取有特定的要求。如果样品处理不当或DNA提取效率不高,可能会影响一步法试剂盒的检测结果。
4. 试剂盒特异性:一步法恒温检测试剂盒可能设计用于检测特定的支原体种类,如果样品中的支原体与试剂盒的特异性不匹配,可能导致假阴性结果。
5. 抑制物的影响:PCR检测可能对样品中的某些抑制物不那么敏感,而一步法恒温检测试剂盒可能更容易受到这些抑制物的影响,从而降低检测的灵敏度。
细胞培养为什么建议使用支原体检测?
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支原体预防的策略主要包括以下几个方面:
1. 控制污染源:通过定期检测和去除细胞培养中的支原体污染,确保细胞培养体系内无支原体存在,从而获得准确有效的实验数据。
2. 改善无菌操作技术:通过提高实验人员的操作技术和意识,避免在细胞培养过程中引入支原体污染。
3.使用无菌设备和耗材:使用无菌的细胞培养设备和耗材,如无菌培养基、血清等,减少支原体污染的风险。
4. 定期消毒和清洁:对实验室环境进行定期的消毒和清洁,包括工作台、培养箱等,以减少支原体的潜在污染。
5. 使用预防性试剂:使用专门针对支原体的预防性试剂,如加入细胞培养基中的预防剂、超净台喷雾、水浴锅预防和细胞培养箱水盘预防等,以预防支原体污染。
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