目前有 210 +种不同种类的支原体分布于人类、动物、昆虫和植物中,其中 20 +种在细胞培养中被发现为污染物。支原体在实验室中的传播来源多种多样,主要来源包括实验室人员、胎牛血清(FBS)或新生牛血清(NBS)、以及由猪来源的胰蛋白酶溶液。此外,来自其他实验室或商业供应商的细胞培养物、培养基、污染的试剂;非无菌供应品、培养基和溶液;实验室人员;培养箱;液氮;空气颗粒和气溶胶;抗*素的过度使用;细胞培养器皿的不正确密封;以及其他的支原体细胞培养物等都可能成为支原体的传播途径。
支原体检测有哪些方法?北京细胞支原体预防试剂货期
巢式PCR法和一步法恒温支原体检测试剂盒各有优缺点,具体哪个更好要根据实验需求和条件来决定。
1. 巢式PCR法通过两轮PCR扩增来提高检测的特异性和灵敏度。它的优点是:
2. 特异性强,可以减少假阳性结果。
3. 灵敏度高,可以检测到很低数量的支原体。
4. 通过设计多对引物,可以覆盖多种支原体种类。
不过巢式PCR法也存在一些缺点:
1. 操作复杂,需要两轮PCR反应。
2. 容易受到PCR抑制物的影响,产生假阴性结果。
3. 反应后需要开盖电泳检测,增加了污染的风险。
而一步法恒温支原体检测试剂盒采用等温扩增技术,具有以下优点:
1. 操作简便,只需一次反应即可完成检测。
2. 灵敏度和特异性也很高,可检出10个拷贝以上的支原体污染。
3. 反应后无需开盖,减少了污染的风险。
但一步法试剂盒的缺点是:
1. 灵敏度虽高,但可能略低于巢式PCR法。
2. 价格可能比巢式PCR试剂盒要高。
细胞培养支原体检测方法恒温扩增支原体及污染方式有哪些?
支原体污染后的细胞是否应该直接丢弃还是尝试重新培养,这取决于多种因素,包括细胞的重要性、污染的程度、以及是否有有效的方法来清*支原体。以下是一些处理支原体污染的常见方法:
1. 直接丢弃:对于非重要的细胞,如果培养中的细胞、WCB的细胞等,可以采取直接将培养物与用过的培养基灭活后丢弃的方式。
2. 使用支原体清除剂:支原体清除剂处理细胞,作用浓度为25μg/ml,两周可以清*支原体。
3. 使用支原体清*培养基:每2~3天更换一次新鲜培养液,并用无菌的PBS洗涤细胞,处理15天后进行支原体检测,以确定支原体是否被完全去除。
4. 支原体去除试剂:这是一种混合制剂,可以通过抑制DNA和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清*效果,且对细胞无伤害
支原体检测的应用场景非常广*,以下是一些主要的应用领域:
1. 细胞培养:在实验室和生物制品工厂中,细胞培养过程容易受到支原体污染。支原体污染可能导致细胞功能改变,影响实验结果和生物制品的质量。因此,支原体检测在细胞培养的质量控制中至关重要。科研中常用等温扩增的方法简单便捷。
2. 生物制品生产:在生物制品的生产过程中,如疫苗、生物药物等,需要确保产品无支原体污染,以保证其安全性和有效性。监管机构要求在生产的关键阶段进行支原体检测。通常采用qPCR的方式进行。
一步法支原体检测试剂盒怎么防污染?
细胞库支原体检测的必要性主要体现在以下几个方面:
1. 确保细胞库的质量与安全性:细胞库的建立需要为生物制品的生产提供检定合格、质量相同、能持续稳定传代的细胞。支原体检测是确保细胞库中细胞质量的重要环节。
2. 符合监管要求:支原体检测是生物制品安全性监管的一部分,全球范围内的药典、法规和指导文件中都有支原体检测的相关说明。
3. 避免对生物制品的影响:支原体污染可能会影响生物制品的安全性和有效性,因此需要通过检测来避免这种风险。
4. 维护细胞培养的稳定性:支原体是真核细胞和干细胞培养中最常见的问题之一,它们可以改变细胞的代谢、减缓增殖速度,甚至引起染色体畸变。
5. 预防交叉污染:由于支原体可以通过气溶胶和微粒污染实验室其他区域,支原体检测有助于预防交叉污染的发生。
6. 保障数据的可靠性:支原体污染可能会影响实验结果的准确性,因此定期进行支原体检测有助于保障研究数据的可靠性。
7. 常规监测的重要性:支原体应成为细胞培养实验室的常规监测项目,以确保细胞培养的质量和安全。
8. 遵守药典规定:根据中国药典的规定,每8~12代细胞培养物应进行支原体检查,以符合规定。
细胞培养中支原体污染的后果?上海支原体去除多少钱
支原体去除试剂使用之后,对支原体的检测是否有影响?北京细胞支原体预防试剂货期
需要定期检测支原体污染的客户主要包括以下几类:
1. 生物医药企业:生产涉及细胞培养的生物制品的公司,包括疫苗、生物药物、基因产品等。
2. 细胞公司:进行细胞产品的研发和生产的企业,需要确保所用细胞的安全性和有效性。
3. 科研机构:从事细胞生物学、分子生物学、遗传学等研究的学术机构,需要保证实验结果的准确性。
4. 临床单位:使用细胞技术进行的医院或诊所,需要确保用细胞的质量。
5. 细胞库:保存和供应细胞株的细胞库,需要对细胞资源进行定期检测以保证其无污染。
6. 生物技术公司:提供生物技术服务的公司,如细胞培养、基因编辑等,需要确保服务过程中细胞的质量。
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