核酸检测技术(PCR),是公共卫生流行病学中的重要检测手段。这是因为,PCR在群体健康监测中具有多重优势:采样简单,可合并样本,筛查范围广,检测成本低;敏感性高,特异性强,可及时发现传染初期的患者,有助于防止病毒进一步扩散;出具结果快,可实现对群体的实时动态监测等。巧亦捷核酸检测一体机采用国际领、先的薄膜微流控技术,实现了从核酸提取、PCR扩增、荧光检测全流程自动化芯片内完成,样本进,结果出,检测时间短,全程无需专业技术人员参与,可实现基于病症的多项目联检,特别适合宠物医院、兽医站、养殖场等现场快检应用场景。PCR是可以做到病原体准确诊断的技术,与胶体金试纸及荧光定量试纸的应用场景相同。苏州荧光PCR技术在动物疫病检测的应用
PCR的工作原理:在TaqDNA聚合酶(热稳定DNA聚合酶)的作用下,由一对特异性引物经热变性-退火-延伸反应,三个不同温度的循环处理使得DNA由少量扩增到多量的一种体外DNA扩增技术。在反应体系内,以一对人工合成的寡核苷酸作为扩增引物,第一步,模板DNA变性,以构成脱氧核糖核酸的四种脱氧核苷酸为底物,目的基因作为模板,在DNA聚合酶的作用下模板DNA经过80-90℃高温变性,使模板DNA双链经PCR扩增形成的双链解离成单链。第二步,模板DNA与引物退火(复性),模板DNA解离成单链后温度降至50-60℃,引物与模板DNA单链互补配对。第三步,引物的延伸,DNA模板-引物结合物在DNA聚合酶作用下,70-75℃以dNTP为反应原料半保留复制合成一条新的模板DNA链。这三个步骤为一个循环,2-4分钟即可完成一个循环,2-3小时就能使极微量的DNA、片段、甚至单拷贝基因复制到几百万倍,从而实现对靶DNA的放大。由于扩增碱基序列按照靶DNA复制,因此PCR反应具有高度特异性。荧光PCR仪器生产公司巧亦捷核酸一体机灵敏度高,可以做到早期诊断,实现及时诊疗,减少患病动物痛苦,获得更好的疗效。
PCR在传染病诊断中有灵敏度高的优势,可以做到早期诊断,实现及时诊疗,减少患病动物痛苦,获得更好的疗效。预后评估,监控诊疗效果。且适用范围广不同传染病的检测效果相同。不存在诸如免疫学方法中出现的猫类检测试纸卡效果不佳的情况。PCR是目前大多数犬猫传染病的诊断方法。也是宠物医院必备的仪器之一,但市面上大多数都是PCR扩增仪,即需要人工进行核酸提取和纯化。而巧亦捷核酸一体机则囊括了核酸提取和PCR扩增部分,仪器自动操作,极大减少了宠物医院的仪器预算,真正做到全自动一体化检测。
PCR检测技术以灵敏度高,稳定性强为优势深受兽医师的青睐,以常见的猫传腹为例:猫传腹是由猫肠冠状病毒的突变引起。猫传腹为分干性和湿性两种。如果不用PCR技术的话,干性和湿性传腹均不好确诊。但如果采用PCR技术,抽取患猫腹腔或胸腔积液进行检测,约45分钟就可以确诊是否是湿性猫传腹。而针对于干性传腹,大多数病猫会呈现淋巴结肿大。所以也可以通过PCR技术检测淋巴结的穿刺液来确诊。PCR技术在猫传腹方面的应用极大缩短了确诊的时间,从而争取到更多的诊疗时间,患猫生存的机会也就更大。巧亦捷核酸一体机的检测项目范围很广,像猫瘟、猫鼻气管炎、猫上呼吸道的各类症状、犬流感、犬瘟、犬细小、犬呼吸道和肠道的疾病、狂犬病等多种疾病均可以快速确诊,为诊疗争取了更多的时间。传统的免疫学检测(如:荧光和胶体金)存在灵敏性和特异性的局限性。
市面上一般的实时荧光PCR检测过程:待检样品通过DNA提取试剂盒提取DNA。样本制备完成后,进行荧光定量PCR扩增。Ct值由实时荧光PCR仪软件自动确定。此法需要配置实时荧光PCR仪,这对中小型宠物医院、兽医站等来说,是一笔不小的负担:且操作需要更专业的技术人员。巧亦捷针对此产品痛点特推出薄膜微流控核酸检测一体机,集核酸提取、PCR扩增为一体,无需专业实验室、无需专业检测人员,真正实现了“样本进,结果出”,大部分检测项目可在30~70分钟内完成,检测快速、结果准确。目前对传染性疾病更先进,准确性更高,临床价值更大的是PCR 检测方法,也是目前国外普遍采用的检测方法。苏州荧光PCR技术在动物疫病检测的应用
分子诊断技术大致划分为PCR技术、分子杂交、基因测序、核酸质谱、生物芯片5大类。苏州荧光PCR技术在动物疫病检测的应用
巧亦捷核酸一体机采用的TaqMan探针法介绍:TaqMan探针法是具有高度特异性的定量PCR技术。它的工作原理是在PCR反应体系中存在一对PCR引物和一条探针,探针的5′端标记有报告基团,3′端标记有荧光淬灭基团,探针只与模板特异结合,其结合位点在两条引物之间。当探针完整的时候,报告基团的荧光能量被淬灭基团吸收,所以仪器搜集不到信号,随着反应的进展,Taq酶遇到探针,利用3′→5′外切核酸酶的活性把探针切断,导致报告基团的荧光能量不能被淬灭基团吸收,产生了荧光信号,因此信号的强度就代、表了模板DNA的拷贝数。苏州荧光PCR技术在动物疫病检测的应用