Hoechst33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂,它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst33342常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst33342-DNA的激发和发射波长分别为350nm和460nm。可溶于水。4.染色程序:(1)用PBS或合适的缓冲液制备10~50µMHoechst33342染料。(2)将1/10细胞培养基体积的Hoechst染料溶液加入细胞培养物中(可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲液代替培养基)。(3)在37℃培养细胞10~20分钟。(4)用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。(5)用带有350nm激发波长,460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。D-荧光素钾盐小动物成像。深圳荧光染料荧光素酶
其他细胞结构常用染料生物染料在细胞结构和组分鉴定中有着广泛的应用,除细胞膜研究外,我们经常也会对一些其它细胞结构及成分进行探索,例如线粒体、溶酶体、蛋白质、细胞核等,而对于不同的细胞结构有不同的染料进行染色细胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液(DAPIStainingSolution)常用于细胞核染色,可将细胞核染成蓝色。鬼笔环肽(Phalloidin)是细胞骨架的染色神器,罗丹明标记的Phalloidin(TRITC-Phalloidin)可将细胞染成橙红色,DAPI与Phalloidin染色液是研究细胞形态变化时经常用到的两种共染的试剂,染色效果可见A1-E1用TRITC-鬼笔环肽(橙红)染色的细胞骨架免疫荧光图;A2-E2用DAPI(蓝色)染色的细胞核免疫荧光图;A3-E3合并的L929细胞免疫荧光染色图。是S100A16过表达或下调前后PDAC细胞形态的变化。深圳荧光染料荧光素酶D-荧光素(D-Luciferin)是萤火荧光素酶底物,其量子效率为0.88,是Luminol的20倍。
在荧光显微术中,不仅蛋白质结构感兴趣,而且对核酸也感兴趣。有时有必要通过检测细胞核来确定细胞的确切位置或数量。最常见的DNA染色剂之一是DAPI(4',6-二氨基-2-苯基吲哚),主要与DNA双螺旋富含A-T的区域结合。与未结合态相比,DAPI在DNA上的荧光强度增加。染料被UV(紫外线)光激发,比较大激发波长为358nm。发射光谱较宽,峰值在461nm。弱荧光也可以检测到RNA结合。在这种情况下,发射转移到500nm。有趣的是,DAPI能够渗透完整的细胞膜。因此,该染料既可用于固定细胞也可用于活细胞。
小动物***成像技术(invivoimagingtechnology)是利用高灵敏度的光学检测仪器直接检测动物***体内的细胞活动和基因行为研究的一类技术,是近年来发展**快的生命科学研究方法,是**直接观察细胞和分子在体内行为的新兴技术,已广泛应用于生命科学研究的各个领域[1]。***动物体内光学成像主要采用生物发光与荧光发光两种技术。生物发光是利用荧光素酶报告基因在***内表达产生的荧光蛋白与体外注射的荧光素底物发生化学反映产生荧光。而荧光发光成像技术是将荧光物质或荧光物质标记的小分子物质如基因、细胞也可是小分子药物、抗体、纳米材料等导入到***体内,通过小动物***成像系统的激发光源激发荧光集团到达高能量状态,而后产生波长较激发光长的发射光,然后通过高灵敏度制冷CCD镜头探测到***内的发射光。通过***成像技术可以观测***动物体内**的生长和转移、炎症的发生、特定基因的表达和药物作用效果等生物学过程。异硫氰酸荧光素(FITC) 是一种有机荧光染料,目前,这种荧光染料仍用于免疫荧光和流式细胞术中。
一、体外生物发光试验荧光素试剂的制备:D-荧光素,钾盐,无菌纯水,完全培养基(自行配置)1、用无菌水制备100X荧光素原液(15mg/ml),轻轻颠倒摇动至荧光素完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。2、将D-luciferin,potassiumsalt溶解于预热好的组织培养基中制备成浓度为150μg/ml的工作液。用组织培养基1∶100稀释储存液,配置工作液(终浓度150μg/mL)3、去除培养细胞的培养基图像分析前,向细胞培养板中添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析-注射器滤膜过滤除菌,0.2μm注:成像前在37℃下对细胞进行短时间孵育可增强信号。Cy7 DiC18(DiR)是一个亲脂性、近红外荧光花青染料,这个染料常用于标记细胞质膜。湖北荧光染料IR825
吲哚菁绿在生物识别和药物输送方面也有广泛的应用。深圳荧光染料荧光素酶
一种发光杂环化合物,存在于生物发光的生物体中,如萤火虫。在含有三磷酸腺苷的情况下,通过荧光素酶氧化脱羧产生光。可用于荧光素酶生物发光成像和细胞高通量筛选应用。D-荧光素(D-Luciferin)是萤火荧光素酶底物,其量子效率为0.88,是Luminol的20倍。反应原理:首先,在镁离子存在下荧光素酶使荧光素与ATP反应,接着它被氧化形成二氧杂环丁烷结构并发出黄绿色的光。Luciferin-luciferase发光用于ATP监控以测定细胞活力以及细菌计数。它还用于报告基因检测。可与小动物***成像系统配套使用,用于标记LUC基因后的体内***荧光检测。D-荧光素游离酸(D-Luciferin,freeacid)、D-荧光素钾盐(D-Luciferin,potassiumsalt)和D-荧光素钠盐(D-Luciferin,sodiumsalt),钾盐、钠盐的形式是**通用的,因为它们都易溶于水。钾盐也是***动物检测使用的主要形式。它们的激发和发射波长分别为328nm和533nm。深圳荧光染料荧光素酶