细胞爬片免疫组化检测实验步骤
1、选择贴壁良好的细胞爬片，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。
2、PBS洗3次，每次5min。3、切片放入3%过氧化氢溶液，室温下孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶。
4、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封闭20min（封闭电荷）。
5、去除BSA液，每张切片加入50μl稀释的一抗覆盖组织，4℃过夜。
6、PBS洗3次，每次5min。
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7、去除PBS液，每张切片加50μl-100μl相应种属的二抗，4℃孵育50min。
8、PBS洗3次，每次5min。
9、去除PBS液，每张切片加50-100μl新鲜配制DAB溶液，显微镜控制显色。
10、显色完全后，蒸馏水或自来水冲洗，苏木素复染，1%盐酸酒精分化（1s），自来水冲洗，氨水返蓝，流水冲洗。
11、切片经过梯度酒精（70-100%）10min一个梯度，脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。 免疫组化结果分析是什么？山西靠谱免疫组化实验
免疫组化在什么情况下进行组织抗原修复，抗原修复的条件是什么？
（1）由于组织中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定过程中，发生了蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定族重新暴露，提高抗原检测率。
（2）修复方法从强到弱一般分为三种，高压修复、微波修复、胰酶修复。修复液也分为若干种（具体的可以查阅相关资料，大量的：中性的、高pH的等）。
（3）微波修复，我们一般用6min*4次，效果不错。
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免疫组化的抗原修复
很多抗原的可视性可以通过抗原修复来提高，抗原修复可以打破福尔马林固定时形成的蛋白质交联，从而使被掩藏的抗原显现出来。抗原修复技术包括不同时间长度的加热或者利用蛋白酶来做酶消化，例如蛋白酶K，胰蛋白酶或胃蛋白酶。加热的方法通常会用到微波炉，高压锅，蒸箱或水浴。将样品在接近100°C高温加热20分钟后再冷却同等的时间。**常用的抗原修复液有a)柠檬酸盐缓冲剂,pH6.0,b)Tris-EDTA,pH9.0和c)EDTA,pH8.0.如需要可用柠檬酸盐缓冲剂做抗原修复：柠檬酸盐缓冲剂配方:10mM柠檬酸钠,0.05%Tween-20,pH6.0或10mM柠檬酸,0.05%Tween-20,pH6.0将含有柠檬酸钠或柠檬酸盐缓冲剂的染色盘放到蒸箱或者水浴中，预热到95-100°C。将切片浸没于染色盘中。盖子虚掩，孵育20-40分钟(研究者需自己决定比较好的孵育时间)。关掉蒸箱或水浴，将染色盘置于室温下，让切片冷却20分钟。在TBS-Tween-20中漂洗切片2次，每次2分钟。开始封闭步骤。
确定cancer分期，免疫组化技术应用于临床可以进行处理哦，英瀚斯生物为您处理。cancer分期是判断预后的一个指标，与是否浸润、有无淋巴管或血管侵袭密切相关，而通过免疫组化方法可以判断cancer是否浸润、有无淋巴管或血管侵袭。层黏连蛋白和Ⅳ型胶原的单克隆抗体可以清楚的显示基膜的主要成分，用于区分原位*和浸润*，一旦上皮性*突破基膜为浸润，未突破基膜为原位;显示血管和淋巴管内皮细胞的标记物第八因子相关蛋白、D2-40等则可清楚显示cancer对血管或淋巴管的浸润。因此对许多cancer的良恶性鉴别及有无血管或淋巴管浸润，免疫组化结果作为主要的鉴别依据。有没有做免疫组化比较好的公司？
做免疫组化时如何选择一抗？
1、单克隆和多克隆抗体的选择。由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。
2、应用范围的选择。有的一抗只能用于Westernblotting，或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至标明石蜡切片或冰冻切片。
3、种属反应性的选择（speciesreactivity）。这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差别，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。
4、种属来源，一般兔来源的多是多克隆抗体；而小鼠来源的多是单克隆抗体，但也有另外。根据此来源来选择相应的二抗。
5、生产厂家的选择。
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免疫组化指的是根据抗体与抗原特异结合的原理来检测组织切片中的抗原（如蛋白）。immuno的词根来自操作中所使用的抗体，而histo意味着组织。另一种类似的技术是免疫细胞化学（Immunocytochemistry，简称ICC）。这两个词大家经常混着用，看着好像差不多，但实际上还是有点区别。IHCvsICC对于IHC，组织是来自患者或动物，经过冷冻或石蜡包埋。将这些组织制成约4μm厚的切片，封片后再处理。通过这种方法，研究人员可观察细胞组分的定位，同时维持周围组织的原先结构。对于ICC，大部分细胞外基质及其他基质组分被去除，只剩下整个细胞来染色。ICC的来源可以是细胞悬液，来自患者或动物（如血涂片、拭子等），或在实验室中进行的组织培养细胞系。 山西靠谱免疫组化实验
