细胞培养中如果污染了支原体,会有以下几种影响:
1. 细胞生长受影响:支原体污染会导致细胞生长速度减慢,甚至停止生长。细胞可能会变圆,从培养瓶壁脱落。
2. 细胞形态变化:虽然某些细胞在支原体污染后形态变化不明显,但有些细胞会出现体积增大,细胞碎片增多,培养瓶中细胞间隙出现膜状沉积等现象。
3. 代谢和功能改变:支原体污染会影响细胞的代谢和功能,例如培养液中的精氨酸被大量消耗,引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍。支原体活动还可能引起培养液成分和pH值的变化。
4. 实验结果受影响:使用被支原体污染的细胞进行实验会严重影响实验结果,因为支原体会抑制细胞生长,导致染色体畸变,细胞膜抗原性改变,细胞复苏后存活率降低等。
5. 细胞培养环境的污染:一株污染的细胞可能成为实验室的污染源,对工作区域以及培养箱和液氮罐造成污染,进而污染其他细胞,导致其他细胞继发性污染。
6. 科研结果的重复性问题:由于支原体污染,某些实验结果可能能在支原体阳性的细胞中得到,导致科研结果的重复性受到影响
支原体去除试剂使用之后,对支原体的检测是否有影响?温州细胞培养支原体去除试剂价格
细胞培养过程中如果发现支原体污染,可以采取以下一些方法尝试去除污染:
1. 抗*素治*:使用针对支原体有效的抗*素,如四环素类、大环内酯类、氟喹诺酮类等。根据搜索结果,可以加入高浓度抗*素进行冲击治*,例如庆大霉素 200ug/ml,四环素10ug/ml,卡那霉素50ug/ml,并维持24-48小时后再换入常规培养液。
2. 加温处理:支原体不耐热,可以将细胞置于41°C中处理5-10小时以杀灭支原体。但需注意,高温也可能对细胞造成伤害,因此需要预先确定对细胞影响较小的处理时间。
3. 使用支原体清除剂:市场上有专门的支原体清除剂,按照产品说明使用。
4. 使用支原体清*培养基:如Procell支原体清*培养基,这类产品含有清*支原体的特殊成分,可以抑制支原体生长并挽救珍贵细胞。
5. 物理方法:一些实验室采用过滤的方法,使用0.22μm或更小孔径的滤膜过滤培养基和试剂,以阻止支原体的侵入。
6. 细胞传代:在一些情况下,通过细胞传代可能有助于减少支原体的污染程度。
广州细胞支原体去除试剂价格对于同一个样品,为什么PCR结果为阳性,而一步法恒温检测试剂盒结果为阴性?
支原体污染后的细胞是否应该直接丢弃还是尝试重新培养,这取决于多种因素,包括细胞的重要性、污染的程度、以及是否有有效的方法来清*支原体。以下是一些处理支原体污染的常见方法:
1. 直接丢弃:对于非重要的细胞,如果培养中的细胞、WCB的细胞等,可以采取直接将培养物与用过的培养基灭活后丢弃的方式。
2. 使用支原体清除剂:支原体清除剂处理细胞,作用浓度为25μg/ml,两周可以清*支原体。
3. 使用支原体清*培养基:每2~3天更换一次新鲜培养液,并用无菌的PBS洗涤细胞,处理15天后进行支原体检测,以确定支原体是否被完全去除。
4. 支原体去除试剂:这是一种混合制剂,可以通过抑制DNA和支原体生长所必须的相关蛋白合成来取得良好的支原体清*效果,且对细胞无伤害
巢式PCR法和一步法恒温支原体检测试剂盒各有优缺点,具体哪个更好要根据实验需求和条件来决定。
1. 巢式PCR法通过两轮PCR扩增来提高检测的特异性和灵敏度。它的优点是:
2. 特异性强,可以减少假阳性结果。
3. 灵敏度高,可以检测到很低数量的支原体。
4. 通过设计多对引物,可以覆盖多种支原体种类。
不过巢式PCR法也存在一些缺点:
1. 操作复杂,需要两轮PCR反应。
2. 容易受到PCR抑制物的影响,产生假阴性结果。
3. 反应后需要开盖电泳检测,增加了污染的风险。
而一步法恒温支原体检测试剂盒采用等温扩增技术,具有以下优点:
1. 操作简便,只需一次反应即可完成检测。
2. 灵敏度和特异性也很高,可检出10个拷贝以上的支原体污染。
3. 反应后无需开盖,减少了污染的风险。
但一步法试剂盒的缺点是:
1. 灵敏度虽高,但可能略低于巢式PCR法。
2. 价格可能比巢式PCR试剂盒要高。
细胞培养中支原体为什么难以彻底消灭?
支原体是一类细菌,由于缺乏细胞壁,具有灵活的膜结构。这使得支原体的形态多变,很难在高倍显微镜下识别。并且能够抵抗压力、温度、渗透压和脱水,对许多针对细胞壁合成的常见抗*素具有抗性。它们的体积非常小,直径通常在0.15~0.3μm,因此能够轻易地穿过过滤系统。支原体能在哺乳动物细胞培养中可以高浓度生长,而不引起明显的混浊或其他可见的污染迹象。
支原体通过特殊的前端细胞器与宿主细胞结合。支原体前端细胞器富含粘附素,可以附着在真核细胞上并穿透宿主细胞。支原体缺乏刚性细胞壁,可能有助于其与宿主细胞膜融合,并交换其膜和细胞质成分。支原体的对细胞的毒性包括支原体侵袭性、分泌的致病酶和一些膜成分等都能够有效地侵犯宿主。
细胞被支原体污染了会有什么影响?
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目前有 210 +种不同种类的支原体分布于人类、动物、昆虫和植物中,其中 20 +种在细胞培养中被发现为污染物。支原体在实验室中的传播来源多种多样,主要来源包括实验室人员、胎牛血清(FBS)或新生牛血清(NBS)、以及由猪来源的胰蛋白酶溶液。此外,来自其他实验室或商业供应商的细胞培养物、培养基、污染的试剂;非无菌供应品、培养基和溶液;实验室人员;培养箱;液氮;空气颗粒和气溶胶;抗*素的过度使用;细胞培养器皿的不正确密封;以及其他的支原体细胞培养物等都可能成为支原体的传播途径。
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