HE染色常见问题:Q5:细胞核呈棕红色改变答:苏木素染液过度氧化;或苏木素染色后反蓝不足导致。应该立即更换苏木素染色液。或在流动自来水(一般自来水PH7.5-7.8),或在稀释的氨水溶液,或在0.2%碳酸氢钠中适当浸泡,这些步骤均可一定程度地加强苏木素染色后的反蓝效果。Q6:伊红染色较淡答:伊红的PH改变了(PH可能已大于5);或反蓝液体未漂洗干净,残留后影响胞浆嗜酸性染色;或者切片太薄并且在随后的脱水步骤停留过久。对策:检查伊红染色液PH,可采用乙酸调至4.6-5.0。根据以上提示,调整实验步骤。HE染色规范化流程及注意事项?山西专业的HE染色服务
HE染色主要是为通细胞及胞核形态、大小来区别各种细胞的,并不是直接通过颜色来区分的,HE染色细胞坏死的三种改变:(1)细胞核的改变:这是细胞坏死的主要形态标志,表现为核浓缩,核碎裂,核溶解。(2)细胞质的改变:由于胞质发生凝固或溶解,HE染色呈深红色颗粒状,如肝细胞坏死出现的嗜酸性小体医学|教育网搜集整理。(3)间质的改变:由于各种溶解酶的作用,基质崩解、胶原纤维肿胀、断裂或液化,与坏死的细胞融合成一片,呈红染的颗粒状无结构物质。南京英瀚斯生物山东性价比高的HE染色检测比较基础的病理染色HE染色。
HE染色反蓝的原理:苏木素染液,细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的双螺旋结构中,两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木素精碱性染料以离子或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。 分化:苏木素染色之后,用水洗去未结合在细胞上的染液,但是在细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附的染料必须用分化液1%盐酸酒精脱去,才能保证细胞核和细胞浆染色的分明,把这个过程称为染色的分化作用。因酸能破坏苏木素的醌型结构,使色素与组织解离,分化不可过度。蓝化:分化之后苏木素在酸性条件下处于红色离子状态,在碱性条件下处于蓝色离子状态,而呈蓝色,所以分化之后用水洗去酸而中止分化,再用弱碱性水使苏木精染上的细胞核变呈蓝色,称蓝化作用,一般多用自来水浸洗即可变蓝,也可用温水(50度温水比较好)变蓝。
HE染色细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色。着***况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变。例如,细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深。HE染色需要哪些材料及实验步骤。
HE染色构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。在普通染色法中,染色液的酸碱度为pH6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色,这些物质称为嗜酸型。如果改变染色液的酸碱度,pH值升高时,则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性;pH值降低时,原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。HE染色技术几种常见的染色问题。新疆推荐的HE染色检测
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HE染色观察肝脏HE染色切片,首先要在显微镜下找到肝脏的标志性结构——肝小叶。显微镜首先调4倍物镜,调准焦螺旋至视野清晰,可以看到肝小叶结构。人的肝小叶之间结缔组织少,小叶分隔不明显,但动物如猪或小鼠,其肝小叶分界非常明显。肝小叶**有**静脉,在横切片上显示为空洞。肝小叶之间为将物镜调制10倍或20倍,就可以清楚地看到肝小叶结构。肝细胞以**静脉为中心向周围放射状排列,称为肝板。一般在20倍物镜下可以清晰看到肝细胞。20倍物镜下,肝细胞内染色为蓝色的是细胞核,细胞核大而圆,居中,异染色质少而着色浅,能清晰看到核仁。肝细胞胞质丰富,多成嗜酸性,当蛋白质合成旺盛时,胞质内出现散在的嗜碱性物质。肝细胞内有丰富的细胞器比如溶酶体、高尔基体、内质网,等等,但是在光镜下是无法看到的,需要在电镜下才能观察到。当然,肝小叶内除了肝细胞,还有胆小管、肝血窦、肝巨噬细胞等组织形态,但是在HE染色时并不容易观察到。做肝脏HE染色切片主要目的一般都是为了观察肝细胞形态是否完整、胞核有无增大、肝小叶形态是否完整,以检测药物等刺激因素对肝脏的损伤作用。山西专业的HE染色服务