纳米颗粒在疫苗递送中往往表现出***的佐剂作用。阳离子聚合物,包括PEI、聚赖氨酸、阳离子葡聚糖和阳离子明胶,已经有报道显示出对Th1反应的强烈刺激,其特征是诱导CD4(+)T细胞增殖和th1相关细胞因子的分泌。此外,阳离子聚合物强烈抑制LPS诱导的巨噬细胞分泌TNF-α。阳离子聚合物的刺激能力与其阳离子化程度有关,阳离子聚合物与阴离子聚合物的中和可以完全消除刺激作用。聚合物的分子量也会影响其刺激能力,分子越大意味着刺激能力越大。阳离子脂质体合成中常用的分子是中性脂质二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。辽宁DOTAP 转染试剂
**近一项与抗血管生成基因传递高度相关的发现是,阳离子脂质体(CLs)选择性地靶向**的血管系统。阴离子或电中性脂质体没有发现这种作用。Campbell和他的同事[95]发现,与电中性脂质体相比,使用CLs在**血管内皮细胞(VECs)中积累更多,CLs通过添加5mol%聚乙二醇来稳定。在两种人类**类型(LS174T和MCAIV)和两个位置(颅窗和背侧皮肤褶腔)中发现了**VECs的选择性递送。**血管中囊泡的分布是不均匀的,这可能与该技术是否足以根除足够数量的**VECs以实现**消退反应有关。有趣的是,注射后24小时,脂质体上50%的摩尔电荷***增加了小鼠肺部的积聚。广州转染试剂疫苗肌内注射脂质体不能引起强烈的毒性反应,这与肺内或静脉注射途径的情况不同。
此外,病毒浓度被认为是影响转导效率的另一个因素。在Haas等人的评估中测试的其他几个参数中,即含有不同辅助蛋白的HIV慢病毒载体构建,纤维连接蛋白片段的存在/不存在以及在人脐带血和胚胎肾细胞的转导培养基中添加多阳离子硫酸鱼精蛋白,只有病毒滴度似乎与病毒转导效率直接相关。转染介质的条件也可能影响转导效率。例如,在转导过程中,使用胎牛血清比牛血清产生更好的转导效率。同样,研究表明,deae-葡聚糖等多阳离子可以比较大限度地减少带负电荷细胞之间的排斥力,并促进病毒转导。影响化学转染效率的因素
在选择合适的小RNA分子进行转染相关功能分析之前,应先确定其实验需要。例如,siRNA*对一个靶标具有高度特异性,而miRNA具有调节多个下游靶标的潜力。如今,可以人工合成各种类型的短长度寡核苷酸来模仿小RNA分子,以研究这些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效应。常用的寡核苷酸可分为模拟物或拮抗剂。模拟物是一种基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA、miRNA或siRNA),其结构使其能够与目标mRNA结合以抑制其功能,从而导致特定基因的翻译抑制。相反,拮抗剂是一种寡核苷酸,它将与互补的小RNA链(如miRNA)结合以拮抗其活性,从而增加目标基因的表达。评估转染效率至关重要,特别是在需要高转染效率以保证特定下游靶标转录后调控的功能研究中。
基于病毒的转染,或者更具体地称为转导,涉及使用病毒载体将特定的核酸序列带入宿主细胞。逆转录病毒,如慢病毒,通常用于稳定转染。相比之下,腺病毒、腺相关病毒(AAV)和疱疹病毒是不能保证稳定转染的病毒载体。与非病毒转染相比,病毒转导被***认为是一种转染难以转染的细胞(如原代细胞)的高效方法。一般来说,逆转录病毒只能用于转染分裂细胞,而腺病毒、AAV和疱疹病毒可用于转染分裂细胞和非分裂细胞。然而,病毒转导与较高的细胞毒性相关,并可能造成病毒***的风险。病毒载体通常包含一个病毒包膜,它包围并保护病毒。表面蛋白可能存在于某些类型的病毒(如腺病毒)的表面,以促进与宿主细胞的接触和通信。病毒遗传物质被包裹在衣壳中,进入宿主细胞后,衣壳将被打开。与腺病毒、aav和疱疹病毒的基因组不同,这些病毒的基因组是单独维持的,逆转录病毒基因组被整合到宿主基因组中。通常,腺病毒和疱疹病毒携带双链DNA, AAV携带单链DNA,而逆转录病毒携带RNA。在大肠杆菌细胞中复制的质粒通常含有二核苷酸频率为1:16的CpG基序,这与细菌DNA中的频率相似。河北体内转染试剂
利用外泌体途径的一种潜在方法是将脂质体核酸重新包装到外泌体中。辽宁DOTAP 转染试剂
基于非病毒的转染方法可以进一步分为物理/机械方法和化学方法。常用的物理/机械转染方法包括电穿孔、声孔、磁***、基因显微注射和激光照射。电穿孔是一种常用的物理转染方法,利用电压瞬间增加细胞膜通透性,允许外来核酸进入。这种方法通常用于转染原代细胞、干细胞和B细胞系等难以转染的细胞。然而,使用高压可能导致细胞坏死、凋亡和长久性细胞损伤。超声辅助转染或超声穿孔涉及使用微泡技术在细胞膜上制造孔,以减轻遗传物质的转移,而激光照射辅助转染使用激光束在质膜上制造小孔,允许外来遗传物质进入。与电穿孔一样,超声穿孔和激光辅助转染也有破坏细胞膜和不可逆细胞死亡的风险。相比之下,磁辅助转染,或使用磁力来帮助转移外来遗传物质的磁转染,似乎对生物的破坏性较尽管效率较低,但对宿主细胞的破坏较小。另一方面,基因显微注射涉及使用特定的针刺穿细胞,将所需的核酸注射到宿主细胞的细胞核中。然而,这项技术需要经过专门训练的人员或机器人系统,他们可以高精度地执行程序,以防止细胞损伤,因此在基因***等临床应用中具有重要价值。与物理或机械转染方法相比,化学转染涉及使用专门设计的化学品或化合物来帮助将外源核酸转移到宿主细胞中。辽宁DOTAP 转染试剂