与IdeS不同，度拉糖肽由两个胰高xue糖素样肽-1 （GLP-1） 分子组成，它们通过柔性 GS 接头连接到人 IgG4 的 Fc 区域。为了分别研究肽和 Fc 区域，从而鉴定结构域特异性 PTM，用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下冻干消化度拉糖肽 1 小时。为了降低样品复杂性，使用内切糖苷酶GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖，并用DTT还原链间二硫键。反相LC-MS对样品的分析表明，使用GlySERIAS进行连接子消化后，肽从Fc区域完全去除。连接子中的大量甘氨酸残基为GlySERIAS提供了许多不同的潜在消化位点，这就是为什么Fc/2和GLP-1肽都被检测为几种变体，其中不同数量的甘氨酸和丝氨酸残基仍然连接。此外，还鉴定了GLP-1肽的氧化。尽管GlySERIAS同时在多个位点进行消化，但一式三份的酶解在获得的不同Fc/2变体的相对量中显示出可重复的结果。在抗体药及核酸药领域，倍笃生物产品线涵盖药物研发的全流程，抗体结构域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶。吉林IgGZEROIdeS蛋白酶抗体酶切
与IdeS不同，Genovis的FabULOUS（SpeB）是一种半胱氨酸蛋白酶，可在来自多个不同物种和亚类的IgG的铰链区域消化，产生Fab和Fc片段。人、小鼠、大鼠、山羊和绵羊的IgG被FabULOUS消化，产生Fab和Fc片段。人IgG1的主要消化位点是......KTHT...例如，制备的Fab片段可用于亲和力研究、Fab糖基化研究和结构研究。对来自多个物种和亚类的IgG有活性–上铰链区域的消化物；快速-在一小时内生成Fab和Fc片段；有效消化小鼠IgG1。FabULOUS来源于化脓性链球菌，在大肠杆菌中表达。FabULOUS的分子量为29kDa，该酶含有His标签。江苏FabALACTICAIdeS蛋白酶蛋白组学Genovis的FabRICATOR MagIC可用于自动分析和监测不同的CQA。
Genovis的FabRICATOR MagIC自动样品制备可用于分析和监测不同的CQA。mAb在生产或储存过程中的氧化就是这样一种CQA，可能会影响zhiliao产品的质量。为了展示FabRICATOR MagIC如何解决这个问题，对6种mAb的混合物进行强制降解（室温下3个月），并通过反相LC-MS进行分析。当在完整水平上分析mAb时，可以检测到mAb5丰度的显着差异，同时出现许多新的峰。然而，无法获得可靠的质量数据。使用FabRICATOR MagIC，mAb5变化的来源在Fab区域内。随后还原为 Fc/2、LC 和 Fd' 片段，可以识别差异是由于 mAb5 Fd' 片段上的色氨酸氧化，通过形成氧代内酯 （+14 Da） 和二氧代内酯 （+30 Da） 以及 mAb5 LC （-18 Da） 的琥珀酰亚胺化来揭示。此外，还可检测到mAb3轻链的异构化。该示例说明了FabRICATOR MagIC在mAb中级分析中的强大功能，它创建的片段足够小，可以精确定位特定的修饰，而无需耗时耗费资源的肽图分析，所有这些都以相对较少的手动操作时间快速完成。
抗体的氧化是可能影响抗体功能的关键质量属性，需要密切定量和表征。它可能导致mAb的体内半衰期、功效和稳定性降低。Genovis的FabRICATOR（IdeS）消化产生的抗体亚基是研究抗体氧化的理想选择。酶解的稳健性允许在受监管的环境中监测抗体亚基氧化。Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一种IgG特异性半胱氨酸蛋白酶，可消化铰链下方单个氨基酸位点的抗体，产生均质的F（ab'）2和Fc片段。该酶用于基于抗体的疗法（如mAb、ADC、生物类似药和Fc融合蛋白）的表征、质量控制、稳定性测试、生产监测和克隆选择。高度特异性-铰链下方的一个消化位点快速–在30分钟内生成均匀的片段池实现基于抗体的生物zhiliao药物的表征和质量控制可固定在即用型离心柱中Genovis的FabDELLO作用于人 IgG1 铰链上方的单个暴露赖氨酸残基。
与IdeS不同，融合蛋白是通过将两种或多种蛋白质或肽的功能组合成一个量身定制的分子来创造的，以专门应对挑战。连接此类蛋白质或肽结构域的常见方法是包含柔性连接子。这些连接子通常富含甘氨酸，例如甘氨酸残基（G），或甘氨酸残基散布丝氨酸残基（GS）以形成重复序列。这为连接子提供了足够的灵活性，不会干扰连接蛋白质结构域的功能。然而，这些新模式带来了新的分析挑战，需要新的工具来促进表征和产品质量监测。中级分析已成为分析单克隆抗体疗法的标准方法，涉及将分子消化成几个定义的亚基。它们足够小，可以获得高质量的质谱图，并为产品质量属性提供特定领域的信息。由于G和GS连接子对常见蛋白酶的降解具有抗性，因此很难分离结构域以进行深入分析。因此，Genovis开发了GlySERIAS，不同于IdeS酶，一种消化柔性富含甘氨酸的连接子的酶。GlySERIAS可以分离不同的功能域，并实现对融合蛋白、多特异性抗体和含有富含甘氨酸的连接子的各种mAb片段进行详细表征的中级方法。IgA2 亚类以三种等位基因形式存在，A2m1、A2m2 和 A2m3。IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白组学
可用于研究特定Fc区域的质量属性，有助于研究GS连接子的修饰。吉林IgGZEROIdeS蛋白酶抗体酶切
Genovis的FabDELLO在铰链上方的单个位点消化人IgG1，并在两小时内生成均质的Fab和Fc片段（Genovis的IdeS在铰链区下方的单个位点进行消化）。生成的片段可用于结晶和高阶结构（HOS）的NMR研究、结合研究等。突变的铰链区域是zhiliao性候选抗体的常见修饰，以降低效应器功能。这些突变可能会影响具有高底物特异性的酶的抗体消化效率。例如，高度特异性的FabRICATOR（IdeS）消化效率对含有常见LALA突变的抗体产生负面影响。FabDELLO作用于人IgG1铰链上方的单个暴露赖氨酸残基，能够对具有突变铰链区域的抗体进行流行的中级LC-MS分析。例如，用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab，在下铰链区域具有LALA突变，并通过反相LC-MS进行分析。消化产生均匀的Fab和Fc片段。用20mMDTT还原片段，用于中级LC-MS分析，发现产生了均相的Fc/2、轻链（LC）和Fd片段。用FabDELLO消化后观察到的定义峰显示出均匀的片段生成和酶的稳健性能。吉林IgGZEROIdeS蛋白酶抗体酶切
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