问：Read-1,Read-2的具体含义是什么？答：双端测序会在cDNA片段的两端先后读取一定长度的碱基（如pe150，就是分别测150bp）得到一对reads，其中一条称为Read-1，另一条称为Read-2。大量文献和实际项目都表明，转录组分析中使用双端reads对于序列拼接和定量都大有裨益。
基因表达水平一般是通过该基因转录的mRNA的多少来衡量的。每个基因转录产生的mRNA的量，是受到时空等多种因素调控的，个体在不同的生长发育阶段，或者不同的组织水平,或者响应不同的实验处理，基因转录出mRNA的量都是不一样的。我们通过featurecounts(Liao Y, Smyth GK and Shi W., 2014)软件统计基因的表达量。 上海融享生物转录测序短周期，高通量，全分析。北京外泌体转录组测序实验
总RNA样本检测合格后，对于真核生物，用带有Oligo（dT）的磁珠富集mRNA，对于原核生物，用试剂盒去除rRNA，向得到的mRNA中加入Fragmentation Buffer使其片断成为短片段，再以片断后的mRNA为模板，用六碱基随机引物合成cDNA一链，并加入缓冲液、dNTPs、RNaseH和DNA Polymerase I合成cDNA第二链，经过QIAQuick PCR试剂盒纯化并加EB缓冲液洗脱。洗脱纯化后的双链cDNA再进行末端修复、加碱基A、加测序接头处理，然后经琼脂糖凝胶电泳回收目的大小片段并进行PCR扩增，从而完成整个文库制备工作重庆真核有参转录组测序机构哪家好上海哪家做转录组好找融享生物。
可变剪接是调节基因表达和产生蛋白质组多样性的重要机制，也是RNA-seq的重要分析内容，常见的可变剪接形式为SE,SE事件形成过
GO 的基本单元是 Term，每个 Term 有一个单独的标示符（由 “GO:” 加上7个数字组成，例如 GO:0072669）；每类 Ontology 的 Term 通过它们之间的联系( is_a, part_of, regulate)构成一个有向无环的拓扑结构。GOSlim 是缩减版的 GO 术语，它提供了 GO 注释的概述性结果。
京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）是一个整合了基因组、化学和系统功能信息的数据库。把从已经完整测序的基因组中得到的基因目录与更高级别的细胞、物种和生态系统水平的系统功能关联起来是KEGG数据库的特色之一。KEGG 注释主要包括：（1）KO （KEGG Ortholog）注释，即将分子网络的相关信息进行跨物种注释； （2）KEGG Pathway 注释，即代谢通路注释，获得物种内分子间相互作用和反应的网络
问：聚类分析是怎么做的？
答：聚类使用的为R中的聚类软件包pheatmap，所针对的数据为（差异基因的并集），以基因的表达水平值log10(FPKM+1)值进行聚类。其采用相应的距离算法，算出每个基因之间的距离，然后通过反复迭代，计算基因之间的相对距离，根据基因的相对距离远近来分成不同的subcluster，从而实现聚类。该软件包是**的，只需通过R来运行。
问：如何判断差异基因在两个样品间的差异大小？
答：差异的情况可通过|log2Foldchange|来判断，|log2Foldchange|越大，差异倍数越大。 转录测序技术服务靠谱公司上海融享生物科技有限公司多年技术服务经验更放心。
转录组测序技术是把mRNA,smallRNA,and NONcoding RNA等用高通量测序技术把它们的序列测出来。快速地获取某一物种特定组织或者其他的在某一状态下的几乎所有转录本。反映出它们的表达水平。 基因表达谱指通过构建处于某一特定状态下的细胞或组织的非偏性cDNA文库,大规模cDNA测序,收集cDNA序列片段、定性、定量分析其mRNA群体组成,从而描绘该特定细胞或组织在特定状态下的基因表达种类和丰度信息，这样编制成的数据表就称为基因表达谱。融享生物是提供转录组测序，宏基因组，16SITS等扩增子服务商之一。湖南医学转录组测序公司
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基因本体论联合会建立的数据库（Gene Ontology）。GO的产生主要是为了解决同一基因在不同数据库定义的混乱性以及不同物种的同一基因在功能定义上的混乱性。它是一个国际标准化的基因功能分类体系，提供了一套动态更新的标准词汇表（Controlled Vocabulary）来清晰的描述生物体中基因和基因产物的属性。GO 涵盖三个方面，分别描述基因的分子功能（Molecular Function）、细胞的组件作用（Cellular Component）、参与的生物学过程（Biological Process）。基因或蛋白质可以通过 ID 对应或者序列注释的方法找到与之对应的 GO 编号，而 GO 编号可用于对应到 GO Term，即功能类别或者细胞定位北京外泌体转录组测序实验
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