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转录组测序基本参数
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转录组测序企业商机

我们的转录组测序信息分析流程主要分为三部分:测序数据质控(QC)、数据比对分析(mapping)和转录组深层分析。其中,测序数据质控包括过滤测序所得序列、评估测序数据质量以及计算序列长度分布等;数据比对分析主要是针对比对到基因组中的序列,根据不同的基因组注释信息依次进行分类和特征分析,并计算相应的表达量;转录组深层分析包括差异表达分析、可变剪接分析、新转录本预测和变异分析等其他个性化分析。

测序得到的某些原始下机序列,会含有测序接头序列以及低质量序列,为了保证信息分析数据的质量,我们对原始序列进行过滤,得到高质量的Clean Reads,再进行后续分析,后续分析都基于Clean Reads。所用的软件为trimmomatic和FastQC。 转录组测序分析找上海融享生物科技有限公司。云南单细胞转录组测序公司

转录组测序(Transcriptome sequencing)是通过二代测序平台快速地获得某一物种特定细胞或组织在某一状态下的几乎所有的转录本及基因序列,可以用于研究基因表达量、基因功能、结构、可变剪接和新转录本预测等。目前,转录组测序已经被很多人应用于基础研究、临床诊断和药物研发等领域。

RNAseq:也叫全转录组测序,是利用高通量测序技术对由mRNA逆转录生成的cDNA序列进行测序,从而获得样品中的RNA信息,各种类型的转录本都可以用深度测序技术进行高通量检测,统称做RNAseq 重庆cirRNA转录组测序实验上海哪家做转录组好找融享生物。

转录组测序的根本目的在于回答特定的生物学问题,因此一个良好的实验方案的设计是其根本。其中,生物学重复的数量、文库类型及测序深度等因素直接关系到结果的好坏。在这里要尤其强调至少三个以上的生物学重复的重要性。三个以上的生物学重复是进行任何可信的下游数据的统计分析的基础,过少的生物学重复或者没有重复将使分析结果的可信度很大成度降低。

而由于转录组情况的复杂,选择合适的文库类型也显得极为重要。文库的选择一般考虑两个问题:

1、RNA样本制备

将样本按Trizol抽提说明书进行总RNA提取,利用琼脂糖凝胶电泳检测提取效果,并进行质检(OD260/280≥1.9)

2、测序文库构建

我们采用标准提取方法从组织或细胞中提取RNA,随后对RNA样品进行严格质控,质控标准主要包括以下几个方面:


(1)1%的琼脂糖电泳检测RNA样品是否有降解以及杂质;


(2)Qubit2.0 Fluorometer:RNA浓度精确定量;


(3)Qsep核酸检测仪(BiOptic Inc.)检测RNA样品的完整性和浓度。


转录组测序进行RNA的研究具有十分多的优点,包括可以检测表达量变化、也可对可变剪接和SNP进行研究、背景噪音小,无信号过饱和问题、数read的数目,所以精确度比基因芯片要高,且可重复性好、无克隆步骤,所以对样品量的要求更低等。获得了测序的原始数据后,我们如何进行数据分析


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测序得到的某些原始下机序列,会含有测序接头序列以及低质量序列,为了保证信息分析数据的质量,我们对原始序列进行过滤,得到高质量的Clean Reads,再进行后续分析,后续分析都基于Clean Reads。所用的软件为trimmomatic和FastQC。

数据处理步骤如下:

(1)去除接头污染的Reads(Reads中接头污染的碱基数大于5bp。对于双端测序,若一端受到接头污染,则去掉两端的Reads);

(2)去除低质量的Reads(Reads中质量值Q≤19的碱基占总碱基的15%以上,对于双端测序,若一端为低质量Reads,则会去掉两端Reads);

(3)去除含N比例大于5%的Reads(对于双端测序,若一端含N比例大于5%,则会去掉两端Reads)。 高通量转录组测序找融享生物。湖北泛转录组测序公司电话

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因表达水平一般是通过该基因转录的mRNA的多少来衡量的。每个基因转录产生的mRNA的量,是受到时空等多种因素调控的,个体在不同的生长发育阶段,或者不同的组织水平,或者响应不同的实验处理,基因转录出mRNA的量都是不一样的。我们通过featurecounts(Liao Y, Smyth GK and Shi W., 2014)软件统计基因的表达量。FPKM(Wagner, et al., 2012)是利用RNA-Seq技术用来定量估计基因表达值的一个非常有效的工具FPKM是Reads per Kilobase Millon Mapped Reads的缩写,由Mortazavi于2008年提出云南单细胞转录组测序公司

上海融享生物科技有限公司坐落在放鹤路1088号第5幢330室,是一家专业的从事生物科技,计算机科技 网络科技等一系列的技术开发,技术咨询,技术服务,产品销售。从事生物科技,计算机科技 网络科技等一系列的技术开发从事生物科技,计算机科技 网络科技等一系列的技术开发从事生物科技,计算机科技 网络科技等一系列的技术开发公司。公司目前拥有专业的技术员工,为员工提供广阔的发展平台与成长空间,为客户提供高质的产品服务,深受员工与客户好评。公司业务范围主要包括:转录组,16S ITS,靶向甲基化, LncRNA转录测序等。公司奉行顾客至上、质量为本的经营宗旨,深受客户好评。公司凭着雄厚的技术力量、饱满的工作态度、扎实的工作作风、良好的职业道德,树立了良好的转录组,16S ITS,靶向甲基化, LncRNA转录测序形象,赢得了社会各界的信任和认可。

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