1、RNA样本制备
将样本按Trizol抽提说明书进行总RNA提取，利用琼脂糖凝胶电泳检测提取效果，并进行质检（OD260/280≥1.9）
2、测序文库构建
我们采用标准提取方法从组织或细胞中提取RNA，随后对RNA样品进行严格质控，质控标准主要包括以下几个方面：
（1）1%的琼脂糖电泳检测RNA样品是否有降解以及杂质；
（2）Qubit2.0 Fluorometer：RNA浓度精确定量；
（3）Qsep核酸检测仪（BiOptic Inc.）检测RNA样品的完整性和浓度。
转录组测序进行RNA的研究具有十分多的优点，包括可以检测表达量变化、也可对可变剪接和SNP进行研究、背景噪音小，无信号过饱和问题、数read的数目，所以精确度比基因芯片要高，且可重复性好、无克隆步骤，所以对样品量的要求更低等。获得了测序的原始数据后，我们如何进行数据分析
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转录组一定要测重复的原因，与你做其他生物学实验一样，没有重复怎么知道你得到结果的可靠，转录组的重复，是为了验证获得基因的测序的可靠性与差异表达的可靠性。转录组的重复有2种，一是生物学重复，一是技术重复，你说单个样品间差异就很大，这是你的生物学重复不好，那你只做一个转录组，那这样的结果偶然性很大，要尽量选择培养条件一致的样做重复。关于多样品的混样，实际上不需要重复，但是做了比较好，混合测序有一定的缺陷，因为混样本生会降低低表达量基因的检测。湖北比较转录组测序机构做全转录组基因测序服务就找融享生物靠谱又专业。
转录组广义上指在某一生理条件下，细胞内所有转录组产物的**，包括：mRNA、ncRNA、rRNA等；狭义上指所有mRNA的**。转录组测序的研究对象为特定细胞在某一功能状态下所能转录出来的所有RNA的总和，主要包括mRNA和ncRNA转录组具有时间特异性、组织特异性、空间特异性等特点。
真核有参转录组测序采用先进的Illumina测序平台，快速、高效地读取高质量的测序数据。
从材料选取，建库测序，到数据分析，每一步都需要科学、缜密的设计，以保障高质量研究成果
将各样品过滤后的测序序列与参考基因组进行比对(mapping)，使其定位到基因组。 本项目分析中，我们使用HISAT2软件进行mapping。参考基因组为Rattus_norvegicus。所用的软件为HISAT2。HISAT采用全局和局部搜索的方法能够有效的比对到RNA Seq测序数据中的spliced reads，是目前比对率比较高 且比较准确的比对软件。在分析过程中，采用软件默认参数
HISAT2的算法主要分为三个部分：
将测序序列整段比对到基因组单外显子
将测序序列分段比对到基因组的两个外显子上
将测序序列分段比对到基因组三个以上（含三个）外显子
上海融享生物转录测序短周期，高通量，全分析。
Illumina高通量测序结果刚开始以原始图像数据文件存在，经CASAVA软件进行碱基识别（Base Calling）后转化为原始测序序列（Sequenced Reads），我们称之为Raw Data，其结果以FASTQ（简称为fq）文件格式存储。FASTQ文件包含每条测序序列（Read）的名称、碱基序列以及其对应的测序质量信息。在FASTQ格式文件中，每个碱基对应一个碱基质量字符，每个碱基质量字符对应的ASCII码值减去33（Sanger质量值体系），即为该碱基的测序质量得分。不同Score表示不同的碱基测序错误率，如Score值为20和30分别表示碱基测序错误率为1%和0.1%。 高通量转录组测序找融享生物。四川miRNA转录组测序
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这些实验设计因素的控制后通过测序就得到了测序数据。我们还需要对原始数据(RAW data) 进行质控，包括对低质量的测序数据的去除，接头序列的去除，rRNA 序列的去除等。经过质控过滤后得到的数据(clean data) 才能进行后续的分析。同时，也可以通过碱基分布、Q20 、Q30 、rRNA 比例等指标初步判断测序质量好坏。至此，我们得到的clean data 就可以进行真正的转录组学分析，解决我们的实际的生物学问题了。那么需要经过哪些分析流程呢？又可以拿到哪些分析结果呢，更多信息可以联系上海融享生物科技有限公司天津全长转录组测序服务
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