一般来说，任何一种DNA测序技术都可用于RNA测序。转录组测序根据发展的阶段可分为：(1)早期的基于Sanger测序法的基因表达序列分析;(2)基于新一代高通测序技术的RNA-Seq。Sanger等于20世纪70年代发明的双脱氧测序法在过去的30多年中一直在DNA测序领域占据着主要地位。人类基因组计划的测序就是通过双脱氧测序法完成的,Sanger法测序是利用DNA聚合酶和双脱氧链终止物测定DNA序列的方法。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核昔酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一种不同的双脱氧核甘三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-0H基团，当ddNTP竞争性的与模板结合后，引物延伸将停止于ddNTP处，使反应得到一组有共同的起始点，但长度不同的链终止产物，通过电泳可将相差只有一个碱基的扩增产物分开，从而达到测序的目的。基于高效毛细管电泳的双脱氧测序法每天快可测1Mb,但相对于庞大的基因组数据，如人类基因组约有30亿碱基，则要耗费巨大的人力物力，因此,HGP耗时13年,耗资约30亿美元。但HGP的实施积累了宝贵的经验，促进了与测序相关技术的发展。转录组怎么做就找融享生物。四川泛转录组测序电话
1、RNA样本制备
将样本按Trizol抽提说明书进行总RNA提取，利用琼脂糖凝胶电泳检测提取效果，并进行质检（OD260/280≥1.9）
2、测序文库构建
我们采用标准提取方法从组织或细胞中提取RNA，随后对RNA样品进行严格质控，质控标准主要包括以下几个方面：
（1）1%的琼脂糖电泳检测RNA样品是否有降解以及杂质；
（2）Qubit2.0 Fluorometer：RNA浓度精确定量；
（3）Qsep核酸检测仪（BiOptic Inc.）检测RNA样品的完整性和浓度。
转录组测序进行RNA的研究具有十分多的优点，包括可以检测表达量变化、也可对可变剪接和SNP进行研究、背景噪音小，无信号过饱和问题、数read的数目，所以精确度比基因芯片要高，且可重复性好、无克隆步骤，所以对样品量的要求更低等。获得了测序的原始数据后，我们如何进行数据分析
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长链非编码RNA（long noncoding RNA, lncRNA）是一类长度超过200 nt的长链非编码RNA，通过与DNA、RNA或蛋白质结合，在表观遗传、转录及转录后等水平调控基因表达。测序采用Illumina测序平台进行测序，针对有参考基因组样本开展准确的lncRNA鉴定和lncRNA靶基因预测，同时提供针对测序数据中mRNA的分析，结果更全，广泛应用于医学、农学研究领域。
非编码 RNA 可分为两种主要类型：基础结构型和调控型 ncRNA。基础结构型 ncRNA 在翻译和剪接中似乎起着类似管家基因的作用，包括核糖体 RNA、转移 RNA 和小核 RNA 等种属。从表观遗传学的角度来看，调控型 ncRNA 更加有趣，因为它们参与了其他 RNA 的修饰
真核转录组测序主要针对转录产物mRNA进行高通量测序，可快速获得某一物种特定组织或者其他的在某一状态下的基因表达量及结构变异等，可用于差异表达分析、挖掘功能基因、RNA编辑分析等。目前已广泛应用于生物学研究、农业、医学等多个领域，揭示生物生长发育调控机制、不同环境适应机制、作物优良形成机理、疾病发***展的分子机理等。
对于真核生物来说基因组比较大，测一个全基因组比较难，但是测转录组还是比较容易实现的。
转录组成为研究基因表达的主要手段，转录组是连接基因组遗传信息与生物功能的蛋白质组的必然纽带，转录水平的调控是目前研究较多的，也是生物体很重要的调控方式。
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问：聚类分析是怎么做的？
答：聚类使用的为R中的聚类软件包pheatmap，所针对的数据为（差异基因的并集），以基因的表达水平值log10(FPKM+1)值进行聚类。其采用相应的距离算法，算出每个基因之间的距离，然后通过反复迭代，计算基因之间的相对距离，根据基因的相对距离远近来分成不同的subcluster，从而实现聚类。该软件包是**的，只需通过R来运行。
问：如何判断差异基因在两个样品间的差异大小？
答：差异的情况可通过|log2Foldchange|来判断，|log2Foldchange|越大，差异倍数越大。 融享生物为您提供一个专业的技术服务，吊炸天的NGS测序技术。全长转录组测序
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其中基因数据库（GENES Database）含有所有已知的完整基因组和不完整基因组。有细菌、蓝藻、真核生物等生物体的基因序列，如人、小鼠、果蝇、拟南芥等等；通路数据库（PATHWAY Database）储存了基因功能的相关信息，通过图形来表示细胞内的生物学过程，例如代谢、膜运输、信号传导和细胞的生长周期；配体数据库（LIGAND Database）包括了细胞内的化学复合物、酶分子和酶反应的信息。
对KEGG中每个Pathway应用超几何检验进行富集分析，找出差异表达基因显性富集的Pathway 四川泛转录组测序电话
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